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含HIV-1 gag、gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒的构建及其免疫原性的研究
将HIV-1中国株42(B亚型)的gag基因及gag与gp120 V3区的嵌合基因gag V3插入腺病毒伴随病毒(AAV)表达载体pSNAV质粒中,构建重组质粒pSNAV-gag及pSNAV-gagV3;采用脂质体转染的方法分别将重组质粒转入BHK细胞,G418筛选得到转入重组质粒并能表达外源基因的细胞系,命名为BHK-gag及BHK-gagV3.用具有重组腺病毒伴随病毒(rAAV)包装功能的一种重组单纯疱疹病毒(rHSV)分别感染这两株细胞系,纯化后得到rAAV,电镜观察可见到大量实心病毒颗粒,核酸杂交检测重组病毒滴度达到1012病毒颗粒/ml,重组病毒感染293细胞,ELISA检测有gag及gagV3基因的表达.用重组病毒免疫Balb/C小鼠,检测抗体及细胞免疫水平,证明重组病毒可以在小鼠体内诱导产生细胞及体液免疫.
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HIV DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫效果的研究
目的构建含HIV-1 B亚型中国株gagV3基因的DNA疫苗及重组腺病毒伴随病毒(rAAV)疫苗,并研究DNA疫苗和rAAV联合免疫的免疫效果.方法将HIV-1 B亚型中国株gagV3基因克隆入真核表达载体pCI-neo上,构建了含HIV-1 gagV3基因的DNA疫苗pCI-gagV3.采用电击法将pCI-gagV3质粒转染p815细胞,用G418压力筛选,得到转入重组质粒的细胞系p815-gagV3,用免疫酶法检测细胞系中HIV-1基因的表达.用该DNA疫苗进行小鼠免疫实验,检测免疫效果;用该DNA疫苗初次免疫,含同样gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒rAAV-gagV3加强免疫,采用免疫酶法检测免疫小鼠血清中HIV-1特异性的抗体水平,用乳酸脱氢酶法检测免疫小鼠的HIV-1特异性CTL水平. 结果 pCI-gagV3可以在p815细胞中表达HIV-1的基因,免疫BALB/c小鼠后可以在小鼠体内诱发HIV-1特异性的细胞和体液免疫反应.HIV-1特异性抗体滴度为1∶20;效靶比为50∶1时,CTL平均杀伤率为41.7%.pCI-gagV3与rAAV-gagV3联合免疫并不能明显提高抗体水平,但可以提高CTL反应,效靶比为50∶1时,CTL平均杀伤率为61.3%,高于单独用DNA疫苗或重组AAV疫苗免疫后产生的CTL活性.结论 DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫可以提高免疫小鼠产生的HIV-1特异性CTL反应.
