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靶向ICP4的小干扰RNA对HSV-1病毒复制能力的影响
HSV-1是一种嗜神经病毒,能引起一系列神经系统严重症状,然而目前抗HSV-1药物易反弹、不能完全清除潜伏的病毒.ICP4对HSV复制、转录起主要调节作用.决定着溶细胞型感染或潜伏状态的平衡点.为了探寻新的抗病毒策略.本课题以HSV-1ICP4基因为靶点,设计合成2对siRNA,并构建重组真核慢病毒表达质粒pL-KO-puror-hU6-siRNA,通过脂质体转染和嘌呤霉素筛选建立靶向ICP4的4个siRNA单克隆细胞系.Real-time PCR法检测细胞系中ICP4的mRNA表达水平,TCID50法检测siRNA对HSV-1病毒复制能力的影响.结果显示靶向siRNA能有效抑制单克隆细胞系中的ICP4表达.并且抑制ICP4的表达后HSV-1病毒复制能力明显减弱,表明靶向ICP4的siRNA对HSV-1复制有明显抑制作用,且多位点siRNA联合干扰对病毒复制有协同抑制效果,有望应用于生物抗病毒药物的制备.
关键词： 单纯疱疹病毒1型(HSV-1) ICP4 RNA干扰 抗病毒 -
单纯疱疹病毒1型立即早期蛋白ICP22研究进展
单纯疱疹病毒l型(Herpes simplex virus 1,HSV-1)感染细胞蛋白22(Infected Cell Protein 22,ICP22)是Us1基因编码的一种翻译后修饰多功能蛋白,为HSV-1的五种立即早期蛋白之一.HSV-1 ICP22能与不同的细胞和病毒成分相互作用来执行不同的功能,包括改变RNA聚合酶Ⅱ(RNA polymerase Ⅱ,RNAPⅡ/PolⅡ)的磷酸化状态、参与抵抗细胞对病毒复制的消极作用、引起细胞周期蛋白A和B水平降低、介导修饰拓扑异构酶Ⅱα、参与胞核内病毒诱导的分子伴侣富集(Virus-induced chaperone-enriched,VICE)区域的形成及促进病毒新生核衣壳的初次包装.这些作用大多与调节病毒在胞核中有效复制相关.此外,HSV-1 ICP22还在限制细胞中的病毒复制、病毒致病力和潜伏感染建立过程中发挥重要作用,但ICP22发挥这些作用的机制尚未知.本文就上述目前国内外对HSV ICP22的研究进展作一综述,以期为后续研究提供参考.
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HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表达分析
目的：原核表达并纯化单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL7蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,初步分析UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的表达特点。方法 PCR方法扩增UL7基因,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7,转化到E. coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得并纯化GST-UL7重组蛋白,将其作为抗原免疫ICR小鼠制备抗UL7多克隆抗体。间接法ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性,使用该多克隆抗体对HSV-1病毒感染Vero细胞后不同时间点的UL7蛋白表达量进行检测。结果 GST-UL7重组蛋白在E. coli BL21( DE3)中高效表达,间接法ELISA检测抗UL7抗体效价可达1∶105以上。 Western blot试验证明抗UL7多克隆抗体可以特异性识别UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero细胞后的不同时间点均检测到了UL7蛋白的表达。结论成功获得GST-UL7融合蛋白,且制备了抗UL7蛋白的多克隆抗体,利用该抗体初步确定了UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的不同时间点均有表达。
关键词： 单纯疱疹病毒1型(HSV-1) UL7 原核表达 多克隆抗体 -
HSV-1 UL18基因重组载体的构建及其编码蛋白VP23的表达
目的:构建含有单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL18基因的原核表达载体.方法:先将UL18基因进行全序列PCR扩增,再将PCR产物克隆进pET-28a(+)质粒,后将重组质粒转化进入原核表达系统E.coli BL21 (DE3)中表达出带有6个组氨酸标签的重组VP23蛋白.结果:UL18基因正确重组进pET-28a(+)质粒,并在E.coli BL21(DE3)中表达.结论:成功构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL18基因的重组载体,并在原核表达系统表达出其编码的衣壳蛋白VP23且带有组氨酸标签,为进一步优化VP23在发酵中的佳表达条件,纯化并大量制备VP23,以及制备VP23的多克隆抗体奠定了基础.
关键词： 单纯疱疹病毒1型(HSV-1) VP23 三聚体 原核表达 -
单纯疱疹病毒1型解螺旋酶-引物酶编码基因重组杆状病毒载体的构建与鉴定
目的:分别构建含单纯疱疹病毒1型(HSV-1)解螺旋酶-引物酶编码基因UL5、UL52与UL8的重组杆状病毒载体.方法:PCR扩增UL5、UL52与UL8基因全长序列,分别克隆至转移载体pFastBac1,转化E. coli DH10Bac,通过转座作用制备分别带有3种目的基因的重组杆状病毒穿梭载体.结果:克隆的各目的基因序列与GenBank中收录序列一致,各目的基因正确重组至杆状病毒穿梭载体Bacmid.结论:成功构建分别插入HSV-1 UL5、UL52与UL8基因的重组杆状病毒载体,为在昆虫细胞内表达组装HSV-1解螺旋酶-引物酶以及建立靶向该酶复合体的药物筛选平台奠定基础.
关键词： 单纯疱疹病毒1型(HSV-1) 解螺旋酶-引物酶 杆状病毒 -
单纯疱疹病毒1型VP16蛋白和VHS蛋白研究进展
单纯疱疹病毒1型(HSV-1)为有包膜的DNA病毒,能引起皮肤性疱疹、角膜炎、脑炎等症状.HSV-1感染细胞后,要么进入裂解性感染阶段,要么进入潜伏感染阶段.受感染的细胞常会启动免疫系统抵抗病毒,而病毒却通过某种机制巧妙地逃避宿主的免疫反应并进入潜伏.进入潜伏感染阶段的病毒又会因机体受某种刺激而被激活进入裂解感染期.在这期间,有两个关键的病毒蛋白一间层蛋白(Viral protein 16,VP16)和内膜蛋白(Virion host shutoff protein,VHS)倍受关注,它们既是HSV-1的结构蛋白,在病毒复制晚期参与病毒颗粒的组装,同时又作为重要的功能蛋白,在病毒感染早期发挥重要的转录调节功能.下面就这两个蛋白相关功能的研究进展作一简要综述:
关键词： 单纯疱疹病毒1型(HSV-1) VP16蛋白 VHS蛋白 -
单纯疱疹病毒1型感染人胚神经细胞的研究
目的观察人胚脑皮层细胞受到HSV-1攻击后的连续病变过程及感染特征.方法采用人胚脑皮层细胞原代培养,接种100 TCID50 HSV-1后用光镜、免疫组化染色观察病变全过程.结果接种HSV-1后4d逐渐出现细胞肿胀、变园、呈气球样改变,出现核内包涵体.结论 HSV-1接种所致的人胚脑皮层细胞出现连续的细胞病变,更接近地反映了人体在自然状态下感染HSV-1后的神经细胞病变过程.
关键词： 单纯疱疹病毒1型(HSV-1) 人胚脑神经细胞 原代培养
