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PEDV流行株的分离鉴定及其遗传进化分析
为了解中国猪流行性腹泻病毒(Porine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行现状,本研究对上海和江苏地区猪场进行了PEDV流行株的分离鉴定.根据GenBank中PEDV的基因序列,对其M基因设计检测引物.检测临床采集的猪腹泻样品,2份临床样品能扩增出特异性目的条带,测序结果证实为PEDV M基因片段.将检测为PEDV阳性的样品接种Vero细胞,并添加不同浓度的胰酶进行病毒传代培养,在添加适量胰酶的Vero细胞上分离到两株病毒并能稳定传代、增殖.选择第22代病毒饲喂新生仔猪,进行回归试验,结果两株细胞毒均能使1日龄仔猪出现典型腹泻症状,进一步证实成功分离到PEDV,命名为JSLS/PEDV/1/2014和JS/PEDV/2/2014株.遗传进化分析,JS/PEDV/2/2014和JSLS/PEDV/1/2014分离株的M基因分别与中国毒株HLJ-2012、BJ-2012-1亲缘性近;S基因与Ⅰ群PEDV流行毒株亲缘性近;两个毒株的ORF3基因均存在51个碱基缺失,与DR13处于同一大分支,与CV777亲缘性较远.
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆的构建
目的 确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能、高致病性蓝耳病发病机制,以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础.方法 根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分5段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到pBlueScript Ⅱ SK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接成JX143株的全长cDNA克隆pJX143和含有遗传标记Mlu Ⅰ限制性内切酶的基因组全长cDNA克隆pJX143.M.结果 全长cDNA克隆经体外合成RNA后转染MA-104细胞,均获得稳定的拯救病毒.通过比较亲本病毒与拯救病毒的病毒滴度、多步生长曲线和利用拯救病毒vJXi43进行动物回归试验,结果发现病毒学及生物学特性没有显著差异.结论 PRRSV的JX143株病毒确实是引起"猪高热综合征"的主要病原;建立了首个高致病性PRRSV的感染性cDNA克隆,证明拯救病毒与亲本病毒生物学特性相同.
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 高致病性 动物回归试验
