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委内瑞拉马脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立
委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equine encephalitis,VEE)是由委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine enceph alitis virus,VEEV)复合物引起的一种人兽共患病.我国目前尚无该病,因此建立一种快速准确的检测方法对预防和控制该病至关重要.本研究通过分析委内瑞拉马脑炎病毒nsp1基因序列的保守性,设计了一对能检测VEEV复合物所有亚型毒株的特异性引物和Taqman探针.通过反应体系和反应条件优化,建立了检测委内瑞拉马脑炎病毒复合物的一步法实时荧光定量RT-PCR方法.该方法检测VEEV经体外转录获得的RNA,检测的灵敏度达3.27×102拷贝/μL.以该方法检测与VEEV同属的东方马脑炎病毒(EEEV)和西方马脑炎病毒(WEEV) nsp1基因相同区段的RNA以及同属的基孔肯雅病毒(CHIKV),结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性.该方法将为可能在我国出现的委内瑞拉马脑炎的侦检提供有效技术手段.
关键词： 委内瑞拉马脑炎病毒 一步法荧光定量RT-PCR 检测 -
3种重要脑炎病毒的多重RT-PCR检测方法的建立
目的:建立针对西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalomyelitis virus,VEEV)和亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)的多重RT-PCR检测方法.方法:分别针对WNV的NS1基因、VEE的NSP2基因和HeV的G基因设计3对引物,建立了同时检测WNV,VEEV和HeV的多重RT-PCR方法.以不同滴度的病毒评估该检测方法的敏感性,同时以中国地区流行的与脑炎相关的黄病毒属和甲病毒属成员为模板验证该检测方法的特异性.结果与结论:所建立的3种病毒的多重RT-PCR方法可同时或分别特异扩增WNV,VEEV和HeV的454 bp,541 bp和723 bp基因片段,敏感度分别达到10 PFU/ml,100 PFU/ml和100 fg/ml;而对中国流行的与脑炎相关黄病毒和甲病毒如日本脑炎病毒、森林脑炎病毒、黄热病毒、登革病毒、东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒的扩增均为阴性.结果表明所建立的多重RT-PCR敏感性和特异性良好,可用于3种脑炎病毒的快速鉴定和甄别.
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妊娠期感染致畸性病毒及母儿结局
Antoniou将孕妇可在妊娠期发生感染的病毒分第3类:一为已知的致畸病毒,共6种（人巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒、水痘—带状疱疹病毒、人微小病毒B19及委内瑞拉马脑炎病毒）;二为病毒传播后可致胎儿损害,共10种（人类免疫缺陷病毒、人乳头瘤病毒等）;三为传播后胎儿不受损害,共6种（天花及狂犬病病毒等）.本文仅对第一类做一综述.1 人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）1.1 生物学性状及流行病学HCMV为疱疹病毒科中大的成员,病毒颗粒直径为180～250nm,为双链线性DNA病毒,具有高度种属特性,分为人、马、牛、猪、鼠等CMV.HCMV可在56C 30min灭活.
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实时RT-PCR法检测感染小鼠不同组织标本中的委内瑞拉马脑炎病毒
目的 为委内瑞拉马脑炎病毒所致疾病的早期诊断和流行病学研究提供技术支持.方法 建立了委内瑞拉马脑炎病毒特异、敏感和快速的实时RT-PCR法,并对委内瑞拉马脑炎病毒感染昆明小鼠的不同组织标本中的病毒载量进行了定量检测.结果 本研究建立的实时RT-PCR法敏感(10TCID50/ml)、特异(对其它甲病毒成员,如东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒检测为阴性).该方法可从委内瑞拉马脑炎病毒感染小鼠后第1d的血液、脾脏、脑组织中检测到不同含量的病毒核酸,而在感染后第3d仅从脾脏和脑组织中检测到病毒核酸.结论 实时RT-PCR法不仅是一种敏感、准确的检测方法,可用来了解病毒感染量与疾病严重程度的关系和评价病毒病疫苗的免疫效果,而且也为VEEV疾病的临床诊断和流行病学监测提供工具.
