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王枣子总黄酮影响佐剂性关节炎大鼠病理的分子机制研究
课题组前期研究发现宿州地方特色药材王枣子中总黄酮(total flavonoids of Isodon amethystoides,TFIA)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)具有一定的治疗作用,并且这种治疗作用可能是通过对miR-152表达的上调实现的,该文进一步研究TFIA对AA大鼠病理机制影响的分子机制.采用完全弗氏佐剂制备AA大鼠,TFIA灌胃治疗,采用Real-time qPCR检测TFIA灌胃治疗对AA大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast like synoviocytes,FLS)中miR-152、甲基化酶DNMT1及甲基化结合蛋白MeCP2构成的负调控环路的影响,对miR-152下游经典Wnt信号通路的影响,对AA大鼠病理基因fibronectin表达的影响.TFIA灌胃治疗显著抑制DNMT1表达,逆转了AA大鼠病理中存在的由miR-152,DNMT1和MeCP2构成的负调控环路,向治疗组FLS转染miR-152 inhibitors后,DNMT1表达显著恢复.TFIA灌胃治疗显著上调SFRP4表达,抑制经典Wnt信号通路关键基因β-catenin,C-myc和ccnd1表达,显著抑制AA病理基因fibronectin表达,向治疗组FLS转染miR-152 inhibitors后,逆转了TFIA灌胃治疗对SFRP4,β-catenin,C-myc,ccnd1和fibronectin表达的影响.TFIA可能通过miR-152表达的上调抑制DNMT1表达,上调SFRP4表达,抑制经典Wnt信号关节基因β-catenin,C-myc,ccnd1表达,抑制RA基因fibronectin表达.
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王枣子总黄酮对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究
目的 研究王枣子中总黄酮(TFIA)对佐剂性关节炎(AA)的治疗作用及机制.方法 采用注射完全弗氏佐剂制备AA模型大鼠后随机分为4组:AA组、AA+TFIA 50 mg/kg组、AA+TFIA 100 mg/kg组、AA+TFIA 150 mg/kg组,每组10只.另设空白对照组大鼠,不造模(n=10).造模后4d,TFIA各剂量组大鼠采用TFIA灌胃治疗,分别按上述3个剂量灌胃,每天1次,共24 d,空白对照组和AA组灌胃生理盐水.治疗第12天、16天、20天、24天采用大鼠关节炎评分法评价TFIA对AA大鼠的治疗作用.治疗第24天处死各组大鼠,分离大鼠滑膜组织,原代培养各组大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS),ELISA检测各组FLS中白细胞介素(IL-1)表达,MTT检测各组FLS增殖活力,real time qPCR检测各组FLS miR-152和经典Wnt信号通路关键基因[β-catenin、细胞周期蛋白基因(ccnd1)]表达.向AA大鼠FLS转染miR-152 mimics和对照NC mimics,向TFIA 100 mg/kg剂量组大鼠FLS转染miR-152 inhibitors和对照NC inhibitors,36 h后检测miR-152、β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS的增殖.结果 TFIA各剂量灌胃治疗均能抑制AA大鼠关节炎评分,抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS增殖活力(P＜0.05),各剂量组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),与空白对照组相比,各剂量组均未恢复至正常水平(P＜0.05).与空白对照组相比,AA组FLS中miR-152表达降低(P＜0.05),向AA组FLS转染miR-152 mimics后,与对照组相比,过表达的miR-152抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达,抑制FLS增殖(P＜0.05).向TFIA100 mg/kg剂量组FLS转染miR-152 inhibitors,与对照组相比,抑制了miR-152的表达,促进了β-catenin、ccnd1、IL-1表达,促进了FLS增殖(P＜0.05).结论 TFIA对AA大鼠有一定治疗作用,此作用可能通过上调miR-152的表达,影响经典Wnt信号通路实现.
