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红曲菌株鉴别中SCAR分子标记的应用
目的:建立一套基于DNA遗传标记技术的红曲菌株快速鉴定方法.方法:采用RAPD方法对分离收集的10个红曲菌株进行多态性分析,从菌株F中获得1个421 bp的特异RAPD标记片段F421.Blast分析未发现F421序列(GenBank登录号EF063107)与GenBank中相关序列有较高同源性.根据该序列设计特意引物,对10个红曲菌株进行PCR检测.结果:利用所获得的特征性片段扩增区域(SCAR)标记能能在1 d内准确地鉴别出红曲F菌株.结论:利用SCAR分子标记技术对红曲菌株进行分类鉴别是红曲研究领域的新尝试,为推广应用SCAR分子标记技术对药用真菌进行菌株快速准确鉴定提供技术依据.
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南、北五味子RAPD-SCAR鉴别研究
目的:为准确鉴别南五味子和北五味子寻找一种新的鉴别手段.方法:采用RAPD-SCAR技术对南、北五味子基因组DNA进行PCR扩增.结果:100条RAPD引物中筛选出2条条带清楚、重复性好的RAPD引物能够区分南、北五味子,并将其转化为SCAR标记.结论:RAPD-SCAR技术是在分子水平上鉴别南、北五味子的一种行之有效的方法.
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基于RAPD标记的SCAR分子标记技术鉴定川牛膝及其混淆品
目的:基于RAPD标记开发SCAR标记,为川牛膝及其混淆品鉴定提供有效方法.方法:建立了收集于四川天全、宝兴、会理、金口河等地的19个牛膝种群(包括川牛膝及其混淆品红牛膝、怀牛膝)的RAPD指纹图谱,从中找到能有效区分上述材料的多态性谱带F300,F500进行克隆与测序;根据测序结果设计2对特异引物对19份材料进行PCR扩增.结果:引物SC-320能稳定地区分川牛膝与怀牛膝,引物SC-495则能稳定地区分川牛膝与红牛膝,2对引物结合能快速准确地鉴定川牛膝、红牛膝和怀牛膝.结论:建立了鉴定川牛膝及其混淆品的SCAR标记技术体系.
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用RAPD技术分析2型糖尿病的遗传多态性
为探讨2型糖尿病和非糖尿病群体间的遗传多态性差异,寻找 2型糖尿病的致病相关基因.本文应用随机扩增多态性DNA技术,从140个随机引物中筛选了25个扩增满意的引物,进行PCR扩增,研究2型糖尿病患者和非糖尿病者各10例.结果:1)5个RAPD图谱表现多态性改变;2)仅K-17的RAPD 图谱的多态性在两组间存在显著性差异(P＜0.001).表明 K-17扩增的RAPD片段与糖尿病的遗传背景有关,可能是与2型糖尿病相关的RAPD 标记.
关键词： 2型糖尿病 RAPD标记 随机扩增多态性DNA技术 -
龙江血居吸虫和日本血吸虫的RAPD分析
龙江血居吸虫(Sangunicola lungensis)和日本血吸虫(Schi st osoma japonicum)依次为冷血动物和温血动物血吸虫的重要代表种类.分别对日本血吸虫与龙江血居吸虫成虫和尾蚴全基因组进行RAPD标记研究,筛选出14种随机引物对4种材料扩增得到150条多态片段,其中日本血吸虫成虫和尾蚴之间的同源性为0.609;龙江血居吸虫成虫和尾蚴之间的同源性为0.617,两种血吸虫成虫之间的同源性为0.148,尾蚴之间为0.1 45.说明了冷血和温血动物血吸虫,它们具有相近的遗传背景,同时揭示了同一种血吸虫, 其成虫和尾蚴阶段存在一定的多态性,反映出在虫体发育过程中,基因组的结构可能发生变化.根据28S rRNA特定基因片段的RAPD分析,筛选出对两种血吸虫不同发育阶段具有特异性的扩增引物,进一步说明同一种血吸虫在不同发育阶段28S rRNA基因片段存在的差异.
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金线莲RAPD-SCAR标记的开发和种质遗传多样性评价
目的 研究不同种质资源金线莲Anoectochilus roxburghii的遗传进化关系,开发高效、实用的分子标记方法.方法在20个不同产地金线莲种质资源的基础上开发RAPD标记,并将其换成特异SCAR标记.结果 从100条RAPD随机引物中筛选出28条具有显著多态性的引物,扩增得到135条多态性位点.RAPD聚类分析显示,当20个金线莲种质资源平均遗传距离为0.748时,可以聚为6类,同一区域起源金线莲基本归为一类,表明不同区域金线莲种质资源存在着显著遗传差异.在此基础上,从多态性RAPD条带中挑选出5个特异位点转换为SCAR标记,并在不同金线莲种质资源中进行验证,结果 显示5条SCAR标记具有显著的种质资源特异性和扩增模式.结论 所筛选的特异RAPD-SCAR标记为加快金线莲优良品种选育进程奠定坚实基础.
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铁皮石斛的SCAR标记研究
目的:建立快速准确的铁皮石斛DNA分子鉴定方法.方法:采用RAPD方法对11种石斛进行多态性分析,获得铁皮石斛特异的RAPD分子标记片段;经克隆、测序,重新设计一对特异性引物转化成稳定的SCAR标记.结果:获得了1条稳定扩增的铁皮石斛特异的片段DS-302,序列测定结果表明,全长302 bp,通过BLAST搜索、同源性比较,结果表明该段序列与已知数据库中的所有序列无显著同源性.根据该序列设计1对特异引物,对11种石斛进行扩增,可在铁皮石斛中扩增获得约300 bp的片段,而石斛属其他种未出现该条带.结论:DS-302成功转化为SCAR分子标记,可对铁皮石斛进行快速有效的鉴定.
