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冷血和温血动物血吸虫28S rRNA基因的扩增和酶切片段分析
用特异性引物扩增日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、龙江血居吸虫(Sangunicola lungensis)的成虫和尾蚴和士耳其斯坦东毕吸虫尾蚴28S rRNA基因片段,并且用Taq I和Hae III两种限制性内切酶对前两者进行酶切,凝胶成像分析结果表明日本血吸虫和东毕血吸虫在该基因片段扩增产物大小表现高度一致,日本血吸虫和龙江血居吸虫在该基因片段的酶切产物存在明显差异,在基因水平证实血吸虫类群中,寄生温血动物同属裂体科的日本血吸虫、东毕血吸虫与寄生冷血动物的血居科吸虫相比,前两者有着非常相近的亲缘关系.龙江血居吸虫成虫在PCR扩增过程中,除了出现1条1 227 bp的主带外,还呈现1条962bp的弱带,在尾蚴则并未出现,单链构象多态性分析(SSCP),日本血吸虫成虫和尾蚴带型一致,龙江血居吸虫成虫呈现出至少3条条带,而其尾蚴表现出清晰的2条条带,进一步证实在发育过程中,龙江血居吸虫虫体间存在有该重复序列的变异.
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龙江血居吸虫和日本血吸虫的RAPD分析
龙江血居吸虫(Sangunicola lungensis)和日本血吸虫(Schi st osoma japonicum)依次为冷血动物和温血动物血吸虫的重要代表种类.分别对日本血吸虫与龙江血居吸虫成虫和尾蚴全基因组进行RAPD标记研究,筛选出14种随机引物对4种材料扩增得到150条多态片段,其中日本血吸虫成虫和尾蚴之间的同源性为0.609;龙江血居吸虫成虫和尾蚴之间的同源性为0.617,两种血吸虫成虫之间的同源性为0.148,尾蚴之间为0.1 45.说明了冷血和温血动物血吸虫,它们具有相近的遗传背景,同时揭示了同一种血吸虫, 其成虫和尾蚴阶段存在一定的多态性,反映出在虫体发育过程中,基因组的结构可能发生变化.根据28S rRNA特定基因片段的RAPD分析,筛选出对两种血吸虫不同发育阶段具有特异性的扩增引物,进一步说明同一种血吸虫在不同发育阶段28S rRNA基因片段存在的差异.
