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细茎石斛不同部位有效成分及分布规律研究
目的:探索多糖、生物碱、微量元素等有效成分在细茎石斛不同部位中的含量分布情况以及加工处理工艺对石斛质量的影响.方法:分析细茎石斛茎的上、中、下部及根部中的多糖、生物碱、必需微量元素含量.应用硫酸-苯酚法测定多糖;氯仿-溴甲酚绿法测定总生物碱;ICP等离子体发射光谱法测定微量元素.结果:细茎石斛含有较高的多糖、总生物碱和钾、钙、镁、铁、锰、锶、钛、铜等微量元素,不同部位含量存在较为显著差异;干燥工艺对细茎石斛多糖含量及不同部位的多糖、生物碱分布有较大影响.结论:细茎石斛含有较高的多糖、生物碱、微量元素等活性物质;石斛干燥加工以高温杀青后60℃烘干为宜.
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中国石斛类药材的原植物名实考
该文简述了中国石斛类药材原植物的名实考证结果,并重点阐述了细茎类石斛植物的分类处理结果.梵净山石斛Dendrobium fanjingshanense、曲茎石斛D.flexicaule、河南石斛D.henanense、霍山石斛D.huoshanense、广东石斛D.kwangtungense、细茎石斛D.moniliforme、铁皮石斛D.officinale、琉球石斛D.okinawense、滇桂石斛D.scoriarum、始兴石斛D.shixingense、大花石斛D.wilsonii等11种石斛属植物得到确认,建议铁皮石斛使用名称Dendrobium officinale.
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曲茎石斛及其近似种鉴别的形态和DNA分子证据
目的探讨曲茎石斛(南阳居群)与同属近似种:细茎石斛(南阳居群)、霍山石斛(霍山居群)、铁皮石斛(天台居群)药材鉴别的形态及DNA分子证据.方法对曲茎石斛(南阳居群)及其近似种的药材进行了外部形态和rDNA ITS序列比较.结果曲茎石斛及其近似种药材的外部形态虽无明显区别,但在rDNA ITS序列上却存在着显著而稳定的差异.曲茎石斛(南阳居群)与铁皮石斛(天台居群)的rDNA ITS序列的差异小,绝对遗传距离为7;但与细茎石斛(南阳居群)及霍山石斛(霍山居群)rDNA ITS区的差异较大,绝对遗传距离分别为40和42.在rDNA ITS区域中,作者共挑选了7个碱基位点用作鉴别曲茎石斛( 南阳居群)及其近似种的DNA证据.结论根据药材的形态特征及rDNA ITS区碱基序列差异,可准确鉴别曲茎石斛及其近似种药材.
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珍稀细茎石斛LEAFY同源基因的克隆及在石斛药材鉴定中的意义
本文基于兰科已有的LEAFY (LFY)同源基因保守区设计引物,对细茎石斛(Dendrobium moniliforme (L.)S w.)的该基因进行克隆及序列分析.通过普通PCR及TaiI-PCR技术得到LFY同源基因-—DenLFY,全长共3 575 bp,包含3个外显子和2个内含子.将DenLFY基因外显子序列提交到NCBI进行BLAST比对,发现该基因与兰科其他植物同源基因序列相似度很高,均达80％以上,其中与蝴蝶兰(Phalaenopsis hybrid cultivar)LFY同源基因(PhalLFY)和文心兰(Oncidium Gower Ramsey) LFY同源基因相似度分别达84％和90％.应用MP的方法,根据不同物种LFY同源基因进行系统发生关系分析,发现细茎石斛与文心兰、蝴蝶兰亲缘关系近.氨基酸序列比对分析结果表明,该基因C端编码的氨基酸相对更为保守.从DenLFY基因外显子和内含子单独分析来看,外显子的获得及其编码氨基酸的推测对于LFY基因功能的研究是一个开端,而内含子2在细茎石斛和铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)中存在长度差异,在石斛药材鉴定方面有着很大的应用潜力.
关键词： 细茎石斛 LEAFY同源基因 Tail-PCR技术 序列分析 -
细茎石斛中抗氧化的有效成分研究
目的 以细叶石斛Dendrobium moniliforme( Linn.) Sw.全草为研究对象,以DPPH法为抑制筛选体系,采用活性追踪的分离方法对猫眼草有效成分进行分离纯化,并对分离得到的化合物进行活性测定.方法 采用多种柱色谱法进行分离纯化,并根据理化常数和光谱分析进行结构鉴定.利用微板紫外比色法,体外测定各化合物对脂多糖(LPS)和干扰素γ-(IFN-γ)诱导的RAW264.7大鼠巨噬细胞NO的生成量.结果 分离得到了6个化合物,分别为4,4′-二羟基-3,3′,5-三甲氧基-,′-二羰基二苯乙烯(1),4,4′-二羟基-3,3′,5,α′-四甲氧基二苯乙烯(2),4,4′,α′-三羟基-3,3',5-三甲氧基二苯乙烯(3),反式-3,5-二羟基-5-甲氧基二苯乙烯(4),3,7-二羟基-2,4-二甲氧基菲(5),毛兰菲(6).结论 化合物1首次从该植物中分离得到,并且化合物1、2和3具,有较强的抑制大鼠巨噬细胞NO生成的作用,化合物3、5和6有强于白藜芦醇和芦丁的DPPH自由基捕捉削去作用.
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细茎石斛多糖DMP4a-1的结构特性及免疫活性研究
目的研究从细茎石斛中分离纯化得到的酸性多糖DMP4a-1的结构性质,初步鉴定其免疫调节活性.方法应用高效凝胶渗透色谱(HPGPC),TLC,GC,GC-MS,IR,高碘酸氧化等方法进行组成结构分析,采用双抗夹心ELISA法检测巨噬细胞TNF-α分泌水平、用CCK-8试剂进行脾淋巴细胞增殖实验.结果细茎石斛水溶性酸性多糖DMP4a-1平均相对分子质量为3 049,主要由葡萄糖,甘露糖,鼠李糖,阿拉伯糖和半乳糖组成,其分子摩尔数之比为2.873:2.850:1.762:1.279:1,糖链结构中存在1→4,1→3及1→6糖苷键,且摩尔数比为1.194:2.430:1.体外实验证明,DMP4a-1可明显刺激巨噬细胞分泌TNF-α,促进脾淋巴细胞增殖.结论细茎石斛多糖DMP4a-1是一种β-D-吡喃杂多糖,在结构上与抗肿瘤多糖类似,富含1→3糖苷键,具有免疫增强功能.
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细茎石斛多糖的提取分离纯化和性能分析
目的提取分离细茎石斛水溶性多糖,并研究其结构性质.方法经提取、离心、沉淀、脱蛋白后的粗多糖,进一步用DEAE-纤维素,Sephacryl S-400HR,Sephacryl S-200HR凝胶渗透柱色谱分离纯化,对分离到的主要多糖应用高碘酸氧化、高效凝胶渗透色谱(HPGPC),TLC,GC,GC-MS,IR等方法进行组成结构分析.结果从细茎石斛水溶性多糖提取物中分离到8种均一多糖,DMP1a-1,DMP1a-2,DMP2a-1,DMP3a-1,DMP4a-1,DMP5a-1,DMP6a-1和DMP7a-1,其中DMP1a-1的相对分子质量(Mr)为28 000,葡萄糖、甘露糖组成摩尔比为1:4.798,分子中1→3、1→4(或1→2)、1→6连接的糖苷键数比为8.75∶23.59∶1,红外光谱数据显示为β-D-吡喃甘露聚糖.结论 8种均一多糖首次从细茎石斛中分离得到,其中DMP1a-1为β-D-吡喃型葡萄甘露聚糖.
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细茎石斛拟原球茎生长与有效成分积累的关系
目的:研究细茎石斛拟原球茎生长规律及其与两种有效成分总生物碱和可溶性多糖积累的关系.方法:采用液体静止培养方法培养细茎石斛拟原球茎,在一个周期(60天)内,每隔10天取样,测定拟原球茎的鲜、干重,总生物碱含量和可溶性多糖含量.结果:液体培养的细茎石斛拟原球茎生长曲线大致呈"S"型,拟原球茎经过10d左右的延迟期后进入对数生长期,第50d左右达到生长高峰,此后,生长缓慢,进入静止期.拟原球茎中总生物碱和可溶性多糖含量随着拟原球茎的生长逐渐积累,在培养的第40d左右达到高峰,之后含量有所下降,这两种有效成分的积累与生长基本同步,且拟原球茎中两种有效成分的含量接近或超过野生植株茎中的含量.结论:液体培养的细茎石斛拟原球茎生长曲线大致呈"S"型,总生物碱和可溶性多糖的积累与生长基本同步,且拟原球茎中两种有效成分的含量接近或超过野生植株茎中的含量.
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细茎石斛的生药学研究
目的:对中药石斛中的细茎石斛进行生药学研究.方法:采用性状、组织横切面及粉末显微鉴别方法.结果与结论:细茎石斛茎和气生根的横切面、维管束鞘纤维、硅质块、草酸钙针晶束等可作为鉴定依据,为中药石斛中的细茎石斛的质量标准的制订和开发利用提供科学依据.
