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木犀草素体外对H1N1感染A549诱导凋亡的干预作用及机制
目的:观察甲型流感病毒(H1N1)感染人肺癌细胞株(A549细胞株)后,木犀草素的作用并探讨其机制.方法:利用基因芯片技术观察木犀草素作用感染细胞后,凋亡信号通路中基因转录的变化.采用qRT-RCR法,测定各组细胞中Caspase-8、Caspase-3和Myd88的mRNA的变化.结果:基因芯片提示,与模型组比较,奥司他韦组和木犀草素组对差异表达基因Myd88、Casp3、Casp6、Casp7、Casp8、Casp9、TRAIL、IL1A、IL1B明显下调.qRT-RCR提示:与模型组比较,奥司他韦组和木犀草素组对差异表达基因Casp3、Casp8和Myd88明显下调.结论:在体外环境下,流感病毒H1N1感染A549细胞激活凋亡通路后,木犀草素能通过降低相关基因表达,干预细胞凋亡,发挥抑制流感病毒的作用.
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流感病毒H1N1感染A549细胞诱导凋亡及川芎嗪干预作用的研究
目的:研究川芎嗪对流感病毒H1N1感染A549细胞诱导的凋亡干预作用,探讨川芎嗪抗流感病毒感染的作用机制.方法:采用荧光定量PCR检测各组细胞中天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达的变化.结果:与细胞对照组比较,H1N1感染组Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达均明显升高(P＜0.01).与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组及川芎嗪高、低剂量组的Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA表达均明显降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:流感病毒体外感染细胞A549后诱导凋亡,川芎嗪能通过调控天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白家族介导凋亡通路的相关基因表达,对病毒感染诱导的细胞凋亡有干预作用,从而发挥抗病毒作用.
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流感病毒H1N1感染A549细胞诱导凋亡及黄芩苷干预作用的研究
目的：研究黄芩苷对流感病毒H1N1感染A549细胞诱导的凋亡干预作用,探讨黄芩苷抗流感病毒感染的作用机制。方法采用基因芯片技术研究流感病毒感染细胞后细胞内凋亡信号通路中相关基因转录的变化。同时,采用荧光定量PCR检测各组细胞中天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白-8(caspase-8)和 caspase-3的mRNA表达的变化。 Western blot法检测各组细胞中的相关蛋白的变化。结果利用基因芯片技术,通过KEGG pathway分析涉及细胞凋亡信号传导途径。与细胞对照组相比, H1 N1感染组差异表达基因Casp3、Casp7、Casp8、Casp10、TRAIL、MYD88、IL1A、和 IL1B明显上调；与H1 N1感染组比较,奥司他韦对照组对差异表达基因Casp3、Casp4和Casp8明显下调；黄芩苷高剂量组对差异表达基因Casp3、Casp4、Casp6和Casp8明显下调；黄芩苷低剂量组除上述差异表达基因外,还明显下调了IL1RAP和Cn。 qRT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组caspase-3和-8的mRNA表达均明显升高。与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组、黄芩苷高低剂量组的 caspase-3和-8的mRNA表达均明显降低( P<0．01)；并且,黄芩苷低剂量组的治疗效果优于高剂量组；该结果和基因芯片表达的结果基本相符。结论流感病毒体外感染细胞A549后诱导凋亡,黄芩苷能通过调控天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白家族介导凋亡通路的相关基因表达,对病毒感染诱导的细胞凋亡有干预作用,从而发挥抗病毒作用。
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结直肠癌组织中胃泌素的表达与Fas/FasL和天冬半胱氨酸蛋白酶的关系
目的 了解胃泌素(GAS)mRNA及其蛋自在结直肠癌组织中的表达情况,并探讨其与结直肠癌细胞凋亡指数(AI)和凋亡调控基因Fas/FasL、天冬半胱氨酸蛋白酶(caspases)的关系.方法 采用巢式RT-PCR方法 检测79例结直肠癌组织中GAS的mRNA表达,用TUNEL法检测细胞凋亡情况,结直肠癌组织中GAS、Fas/FasL、caspase-3、caspase-8的蛋白表达采用免疫组织化学SP法.结果 结直肠癌组织中GAS mRNA与其蛋白表达呈正相关(rGAS=0.99,P<0.01).高、中分化结直肠癌组织中GAS mRNA及其蛋白的表达明显低于低分化者(χ2(高与低)=10.47、10.23,均P<0.01;χ2(中与低)=6.68、4.95,均P<0.05);GAS mRNA及其蛋白在乳头状腺癌、管状腺癌的阳性表达率明显低于黏液印戒细胞癌及未分化癌(χ2(乳与黏印)=4.80、6.22,χ2(乳与未)=5.44、8.43,χ2(管与黏印)=4.40、4.38,χ2(管与未=4.92、6.43,均P<0.05);Dukes A、B期的GAS mRNA及其蛋白阳性表达率明显低于C、D期(χ2=4.84、4.45,均P<0.05).GAS高、中表达组的细胞AI明显低于低表达组,差异有统计学意义(q(高与低)=6.71,q(中与低):4.60,均P<0.01);FasL阳性表达率在GAS低、中、高表达3组间相比,差异具统计学意义(χ2=9.35,P<0.01),其中FasL在GAS高、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组(χ2(高与低)=6.24,χ2(中与低)=4.74,均P<0.05).结论 GAS对结直肠癌细胞凋亡的调控可能与Fas/FasL的表达失衡及其功能和信号系统的紊乱有关.GAS的检测可作为临床结直肠癌生物学行为的评估指标之一.
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小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的相关性
目的 分析小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡调控基因在早期胚胎发育中所起的重要作用,旨在为提高胚胎质量寻找一条新途径.方法 采用脱氧核糖核苷酸未端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)原位荧光检测和Bcl-2免疫荧光检测等凋亡检测技术,以及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光检测细胞增殖程度的技术,分别对小鼠早期形态正常的胚胎、早期发育阻滞的胚胎和有碎片的胚胎进行细胞凋亡程度和增殖程度的检测,比较其凋亡和增殖程度的差异.结果 小鼠早期发育阻滞的胚胎细胞和胚胎中的碎片TUNEL阳性,Caspase活性增强,Bcl-2、PCNA表达水平降低.结论 细胞凋亡与胚胎发育阻滞及胚胎中的碎片形成密切相关.
