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银杏蜜环口服溶液作用p38MAPK调节eNOS/NO信号途径保护人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤
目的:评估银杏蜜环口服溶液对缺氧复氧损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用;从p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/一氧化氮(NO)信号途径探讨银杏蜜环口服溶液保护受损HUVECs的药效机制.方法:缺氧缺糖/复氧复糖法建立体外HUVECs缺血再灌注损伤模型.分为正常组、模型组、银杏蜜环口服溶液高质量浓度组(75 mg·L-1,简称银蜜高),低质量浓度组(36 mg·L-1,简称银蜜低),p38 MAPK抑制剂SB203580组,银蜜高+SB203580组,eNOS抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组,银蜜高+L-NAME组.细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)及微量酶标法检测细胞活力及细胞损伤;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)/p38 MAPK和磷酸化eNOS(p-eNOS)/eNOS蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)含量;硝酸盐还原酶法检测NO含量.结果:银蜜高、银蜜低组可显著提高缺氧复氧损伤HUVECs活力、降低细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量(P ＜0.05,P＜0.01);抑制受损细胞p38的磷酸化(P＜0.05),降低细胞培养上清中TNF-α,sICAM-1含量(P ＜0.05,P＜0.01).在给予银蜜高或(和)SB203580后,受抑制的eNOS磷酸化表达水平显著升高(P＜0.05);银蜜高可显著提高受损细胞NO含量,在加入eNOS抑制剂L-NAME后,银蜜高可拮抗L-NAME降低细胞NO生成和升高Caspase-3的作用(P＜0.05).结论:银杏蜜环口服溶液可提高氧复氧损伤HUVEs活力,具有抗炎、调节内皮系统、抑制细胞凋亡的作用,机制与其作用于p38 MAPK进而调节eNOS-NO信号途径相关.
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p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病大鼠肾组织细胞外基质重构中的作用
目的探讨糖尿病大鼠肾组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及其下游转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB1)的表达特征及与细胞外基质重构的关系.方法雄性Wistar大鼠60只,行右肾切除术2周后,随机均分为右肾切除对照组(CN组)和糖尿病组(DM组).DM组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)65mg/kg诱发糖尿病模型,并于注射后1、2、4、8、12周各宰取6只大鼠,免疫组化检测肾皮质磷酸化p38MAPK(p-p38 MAPK)及其磷酸化CREB1(p-CREB1)的表达特征,Western blot检测肾皮质p38 MAPK 和CREB1磷酸化(活性),RT-PCR检测p38 MAPK、CREB1和纤维粘连蛋白(FN) mRNA的表达.结果与对照组相比,DM病组p-p38MAPK在1、2、4和8周升高,在12周降至正常;p-CREB1在2、4和8周增高,在12周时降至正常; FN于4周开始升高.结论早期糖尿病大鼠肾组织中p38 MAPK及CREB1的活性升高;p38 MAPK途径的激活有可能在糖尿病肾病的细胞外基质重构中发挥一定作用.
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氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏结构、功能及肾组织p38 MAPK的影响
目的探讨特异性血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏结构、功能的保护机制及p38 MAPK信号转导通路对此过程的作用.方法♂ Wister大鼠行右肾切除术2 wk后,随机分为3组,右肾切除对照组、糖尿病组,氯沙坦治疗组.腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg·kg-1)诱发糖尿病模型,氯沙坦40 mg·kg-1·d-1灌胃.分别于注射STZ后4 wk后各组选取6只大鼠,收集尿液,测定尿蛋白(Upro),尿肌酐(Ucr);股动脉放血分离血清,测定血糖(Glu)、血尿素氮(BUN),血肌酐(Scr)并计算肌酐清除率(Ccr).免疫组化检测肾皮质磷酸化p38蛋白激酶(p-p38 MAPK) 及磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达特征,纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)及层粘连蛋白(laminin,LN)的表达,应用图像分析系统进行半定量分析.Western blot及流式细胞术定量检测p-p38 MAPK和 p-CREB蛋白的表达.结果与对照组相比,4 wk时糖尿病模型组肾小球基底膜轻度增厚,细胞外基质(ECM)增多,系膜区扩大,肾脏肥大指数升高,肾功能轻度受损,p-p38 MAPK、p-CREB、FN及LN表达明显升高;而与糖尿病模型组相比,氯沙坦组肾脏结构,功能及各指标的表达有不同程度的降低.结论氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏结构和功能具有保护作用,可能是通过调节p-p38 MAPK和 p-CREB蛋白的表达从而减轻糖尿病大鼠早期细胞肥大和ECM积聚来完成的.
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中医药对p38MAPK通路介导糖尿病肾病的研究进展
糖尿病肾病(DN)是糖尿病严重的慢性合并症之一,是导致慢性肾衰的主要病因,而炎症在其发病机制中的作用举足轻重,可通过信号通路的激活、炎症因子、细胞因子的相互作用等参与DN的发生发展.其中,p38 MAPK介导炎症在DN发生发展中的起到重要的作用.现代新研究以p38 MAPK通路为治疗靶点,新兴的p38 MAPK抑制剂越发成为研究的热点.传统中医药在治疗DN具有独特的优势,结合中医药辨证论治、整体观的理论,为DN的治疗寻找到许多通过抑制p38 MAPK通路起作用的中医药单体及组方,有望成为治疗DN的新型制剂.笔者就近年来中医药对p38 MAPK通路介导DN的研究进展综述如下.
