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抗结核中药材抑菌成分的虚拟筛选及验证
目的 采用计算预测的方法,筛选经典抗结核中药材的抑菌成分,并初步评价筛选成分的抗结核作用.方法 建立经典抗结核杀虫方剂月华丸和百合固金汤中百部、白及、川贝母的成分数据库,应用dock方法进行成分筛选,并以耻垢分枝杆菌为研究对象,采用小抑菌浓度实验和抑菌圈方法评价筛选成分的抗结核作用.结果 通过虚拟筛选方法预测了3个潜在抑菌成分,通过体外实验表明,这3个成分都具有抗耻垢分枝杆菌的作用.结论 应用虚拟筛选方法可提高筛选抗结核杀虫药材中抑菌成分的效率.
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以结核分枝杆菌H37Rv莽草酸脱氢酶为靶点的高通量筛选模型的建立及应用
目的 建立以结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型;用此模型筛选莽草酸脱氢酶抑制剂;进一步评价化合物对莽草酸脱氢酶活性的影响.方法 表达并纯化结核分枝杆菌 H37Rv 莽草酸脱氢酶;利用还原型辅酶 II(NADPH)在溶液中的光吸收,测定酶的活性,构建了该酶抑制剂的高通量筛选模型;用 Z′因子法评价该模型的可靠性,并对 5 万余个化合物进行筛选;测定了各抑制剂的 IC50 并对抑制剂 6186050 的酶抑制动力学进行了研究;用菌液稀释法评价了抑制剂对某些临床分离菌株包括耐药菌株的影响.结果 得到了重组莽草酸脱氢酶;测得比活力为 20987 U/mg,所建的莽草酸脱氢酶高通量筛选模型 Z′因子为 0.76,符合高通量筛选的要求;对 5 万余个化合物进行筛选得到 9 个抑制率较高的化合物;抑制剂 6186050 为竞争性可逆抑制剂;抑制剂 6230384 和 6186050 对海分枝杆菌的低抑菌浓度(MIC)都是 32 μg/ml.结论 建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型筛选得到的抑制剂可能具有抑菌活性.
