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生物安全洁净室
1.生物学危险人类自从发现微生物以来,被微生物感染的病例屡有报导,而就此丧生的也大有人在,就是知名的细菌学家也难例外.而从重组DNA工程诞生以来,这一生物学危险更加扩大了.所谓DNA工程,就是用一种酶作"刀子",把甲种生物的DNA(脱氧核糖核酸)切割下片段,"安装"到载体(如细菌的粒或噬菌体即细菌病毒)上再带到乙种生物的细胞中去,这样产生的乙种生物的细胞就具有甲种生物的遗传信息,改变了其遗传结构,造出了生物新类型.所以,DNA重组工程不仅存在操作过程中各种病毒微生物逃逸的问题,还存在可能具有未知毒性的微生物新种的散播这样极其严重的危险.
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应用Red重组工程技术在大肠杆菌外膜展示表达外源蛋白
目的 将外源蛋白或抗原稳定表达展示于大肠杆菌的外膜上.方法 应用大肠杆菌DY330介导的重组工程系统和kan/sacB无痕迹修饰技术,将长度为1653 bp的荧光素酶报告基因(luc)敲入DY330染色体与外膜蛋白基因lpp、ompA融合.结果 报告基因定量分析结果址明:外源荧光素酶(luciferase,Luc)能够与外膜蛋白融合表达于细菌外膜,Lpp-OmpA-Luc融合蛋白表达于细菌外膜的效率高.结论 外源蛋白能够稳定表达于细菌外膜,不会影响细菌的生长繁殖.
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体内重组工程:功能基因组研究中的一种新武器
基于微生物内源重组系统建立的体内重组工程已成为对生物体内基因功能研究的主要技术,通过基因敲除与嵌入,或大片段DNA的缺失与插入,然后根据生物体表型的变化可以确定该基因或基因簇在体内行使的功能.随着对噬菌体重组系统的认识,发展出了一种新的重组技术可以更简便、更精确、更快速地进行体内基因操作.本文试图就两种重组工程的原理与应用做一综述.
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重组工程法构建德胺糖生物合成基因簇的表达载体
德胺糖(desosamine)是次级代谢产物来源的微生物药物中的一个重要的糖基团.为构建德胺糖生物合成基因簇的异源表达体系,本研究运用重组工程技术一步法从黏粒中克隆了德胺糖的生物合成基因簇的两个转录单元,重组效率高达100%.本方法避免了常规克隆手段的烦琐、耗时、针对长DNA片段的PCR易发生碱基突变等缺点.进一步,将两个转录单元分别置于来源于天蓝色链霉菌的pacⅠ/pactⅢ双向启动子的控制下并克隆至链霉菌的游离型和整合型表达载体上.本工作为探索德胺糖生物合成基因簇在异源宿主菌中表达、德胺糖与多种糖苷底物偶联以创制新化合物奠定了基础.
