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结核分枝杆菌Ag85B蛋白的重组及表达
目的 对结核分枝杆菌Ag85B蛋白进行重组表达,初步评价其免疫反应性.方法 用PCR方法得到Ag85B蛋白的编码基因,构建重组质粒,转化到大肠杆菌BL21中.经IPTG诱导表达,得到高效稳定的表达株,并用蛋白免疫印迹方法检测免疫反应性.结果 获得了高效稳定的重组Ag85B的表达株,并且重组Ag85B有较好的免疫反应性.结论 重组Ag85B有较好的免疫反应性,为结核病快速诊断研究及新疫苗研究提供了基础.
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卡介苗Ag85B对小鼠膀胱癌治疗作用及机制的研究
目的 探讨卡介苗(BCG)Ag85B蛋白对小鼠膀胱癌的抑癌效应及免疫机制.方法 采用T739小鼠皮下膀胱癌模型,肿瘤局部皮下注射BCG Ag85B蛋白,并用BCG和生理盐水作对照,观察各组的肿瘤重量和存活期,利用ELISA方法检测各组的3种主要细胞因子的水平,电镜和光镜观察各组肿瘤细胞的坏死和凋亡情况,利用流式细胞技术检测各组肿瘤细胞凋亡和细胞增殖周期.结果 BCG Ag85B组小鼠肿瘤瘤重显著低于其它两组,其差异有统计学意义(P＜0.05),该组小鼠存活天数显著长于其它2组,P＜0.05;该组小鼠血清中白细胞介素-2、肿瘤坏死因子-α和干扰素-γ的水平明显高于其它2组,P＜0.05;电镜和光镜下观察Ag85B组坏死明显增加.细胞增殖指数下降,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BCG Ag85B蛋白对T739小鼠膀胱癌具有抑制作用,并能延长荷瘤鼠的生存期,不论从细胞因子水平和光镜与电镜观察坏死和凋亡情况,还是从细胞凋亡和增殖情况来看Ag85B蛋白均优于卡介苗.
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结核杆菌H37Ra免疫小鼠后脾淋巴细胞的杀伤活性及免疫机制的研究
目的:探讨结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,产生特异性的脾淋巴细胞杀伤活性及其免疫机制.方法:(1)分别以结核杆菌H37Ra、BCG和PBS免疫小鼠后第30天及第60天,分离各组小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,以表达Ag85B分泌蛋白的Sp2/0细胞为靶细胞,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的杀伤率; (2)在免疫后第60天,小鼠脾淋巴细胞经PPD刺激后,以RT-PCR法检测穿孔素mRNA及颗粒酶B mRNA的表达.结果:(1)结核杆菌H37Ra组脾淋巴细胞的杀伤率明显高于PBS对照组(P＜0.05),略高于BCG组; (2)H37Ra组和BCG组穿孔素、颗粒酶mRNA的表达量均显著高于PBS组(P＜0.05),H37Ra组穿孔素mRNA的表达量显著高于BCG组(P＜0.05),但颗粒酶B mRNA的表达量两组无差异.结论:结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,能增强脾淋巴细胞的杀伤活性,其机制可能与增加穿孔素、颗粒酶B的表达有关.
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结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的免疫学特性
目的研究原核表达的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的免疫学特性. 方法用原核表达的Ag85B蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果. 分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激,MTT方法检测IFN-γ产生水平和MTT法检测淋巴细胞增殖. 结果 Ag85B免疫小鼠可引起较高水平的特异性抗体应答,免疫小鼠的脾淋巴细胞体外用抗原再刺激,淋巴细胞的增殖较显著. MTT方法检测Ag85B免疫小鼠的IFN-γ量为960 pg*L-1,而生理盐水对照组的量低于80 pg*L-1. 结论 Ag85B有可能作为新型结核疫苗的组分.
