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乙型肝炎疫苗细胞免疫应答检测用参考品的制备和初步应用研究
目的 通过研究重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫小鼠诱导细胞免疫应答的特点,制备一批细胞免疫应答检测用参考品,规范乙型肝炎疫苗细胞免疫实验条件和操作. 方法 背部皮下分别免疫小鼠(BALB/c,H-2d)0.5、1、2、4 和 8 μg的 HBsAg,于免后 7 d,检测小鼠脾单个核细胞(MNC)体外刺激诱生 IFN-γ的水平.分别免疫小鼠 2、4 μg HBsAg,免后 7 d,检测MNC分泌 IFN-γ 水平.结果 1 μg组可检测小鼠 IFN-γ阳转;免疫剂量与 IFN-γ阳转率存在剂量效应关系(r=0.951,P=0.049),IFN-γ SFC 与免疫剂量也存在剂量效应关系(r=0.996,P=0.000).2μg HBsAg 组 IFN-γ阳转率在 50%～75% 之间;4 μg 组 IFN-γ阳转率均为 75%. 结论 制备一批乙肝疫苗细胞免疫参考品,用于规范疫苗诱导细胞免疫应答的方法 检测.
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不同种类乙型肝炎表面抗原诱导小鼠早期细胞免疫应答的比较
目的 比较不同表达系统来源的乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)免疫小鼠诱导早期脾淋巴细胞抗原特异性细胞免疫应答的特点,探讨影响乙肝疫苗保护效果的因素.方法 3种HBsAg(汉逊酵母、CHO细胞和血源)分别皮下接种不同组小鼠(BALB/c,H-2d),每只3μg,于免疫后4d分离脾单个核细胞(MNC),经细胞分选仪(MACs)分选后,获得纯度高于90％的CD4+和CD8+T细胞,应用ELISPOT测定MNC、CD4+和CD8+T细胞体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点数( SFC).结果 细胞分选后,汉逊抗原诱导CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平和CD4+T细胞分泌IL-2水平均显著高于CHO抗原组(8/10、2/10,P=0.035;6/10、0/10,P=0.005).汉逊抗原组与血源抗原组CD8+T细胞经体外刺激诱导IFN-y全部阳转(10/10),但分泌水平上汉逊抗原组显著高于血源抗原组(t=2.479,P=0.035)；汉逊抗原组诱导CD4+T细胞IFN-γ阳转率及分泌水平均显著高于血源抗原组(10/10、4/10,P=0.005；t=3.967,P=0.003).结论 乙肝抗原免疫小鼠4d即可诱导细胞免疫应答,且汉逊酵母抗原早期诱导抗原特异性IFN-γ、IL-2的能力显著高于CHO和血源抗原,与其临床考核母婴传播阻断HBV保护率显著优于CHO和血源乙肝疫苗相一致,为及时接种乙肝疫苗的必要性和高危新生儿选择接种乙肝疫苗的类型提供依据.
关键词： 乙型肝炎 表面抗原 细胞免疫应答 酶联免疫斑点法(ELISPOT) -
CFP10/ESAT6融合蛋白-ELISPOT在肺结核病中的诊断价值
目的 探讨CFP10/ESAT6融合蛋白-酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和结核菌素试验(PPD试验)在肺结核病中的诊断价值.方法 应用ELISPOT和PPD试验检测30例结核患者、54例非结核患者和37例健康者,比较两者的诊断价值.结果 国产试剂盒CFP10/ESAT6融合蛋白-ELISPOT检测30例结核患者、54例非结核患者和37例健康者的阳性率分别为70.0％、18.5％和13.5％,PPD试验检测的阳性率分别为60.0％、29.6％和29.7％.在30例结核患者中ELISPOT和PPD试验的灵敏度分别为70.0％和60.0％.在54例非结核组和37个健康组中ELISPOT和PPD试验的特异性分别为83.5％和70.3％.结论 国产试剂盒CFP10/ESAT6融合蛋白-ELISPOT在肺结核的诊断中具有高灵敏度和特异性.
