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北京市市售牡蛎诺如病毒污染状况调查
目的 调查北京市市售牡蛎诺如病毒污染状况,并研究其分子特征.方法 2014年2月至2015年3月在北京市某水产市场摊位采集市售牡蛎样品56件,每件5只,共280只.取牡蛎的消化腺组织进行病毒富集,应用real-time RT-PCR方法检测样品的诺如病毒核酸.对阳性标本采用半巢式RT-PCR方法扩增诺如病毒衣壳蛋白区基因,PCR产物测序后采用BioEdit 7.0.9.0软件进行序列比对.采用MEGA 6.06软件构建进化树.结果 56件样品中,诺如病毒检出率为37.50％(21/56),其中GⅡ 组20件,GⅠ 和GⅡ 组混合1件.冬季诺如病毒检出率高(75.00％,15/20),其次为秋季(3/12)和春季(3/16),夏季未检出.6件GⅡ 组诺如病毒阳性样本测序成功,其中4件为GⅡ.17型、1件为GⅡ.3型、1件GⅡ.18和GⅡ.4 Sydney 2012型混合.结论 北京市市售牡蛎部分有诺如病毒污染,存在引起食源性疾病的风险.
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北京地区市售牡蛎轮状病毒污染调查
目的：调查北京地区市售牡蛎轮状病毒的污染状况。方法2014年2月至2015年3月，在北京市某大型水产品批发市场采集，每摊位采5只为一组，共56组280只牡蛎。用3种方法对样品前处理：直接处理法、PEG 8000沉淀法和蛋白酶K消化-PEG 8000沉淀法。然后利用荧光RT-PCR检测样品的A组轮状病毒核酸，采用半巢式反转录-聚合酶链反应方法对A组轮状病毒核酸阳性进行G、P基因分型。对阳性毒株的VP7和VP4基因进行扩增和测序，采用Mega 6.06软件构建进化树，建树方法为大似然法。结果直接处理法、PEG 8000沉淀法和蛋白酶K消化-PEG 8000沉淀法3种前处理方法A组轮状病毒检出率分别为3.57％（2／56）、7.14％（4／56）和5.38％（3／56）。56组样品中8组A组轮状病毒核酸检测阳性，检出率为14.29％，均在秋冬季检出。轮状病毒基因型组合型为G9／P[8]（2株）和G9／P[N]（6株）。3株轮状病毒VP7基因和1株轮状病毒VP4基因成功测序，进化分析显示与近年来我国流行的G9／P[8]型毒株同源性高。结论北京地区秋冬季市售部分牡蛎存在轮状病毒污染，有引起食源性疾病的风险。
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半巢式RT-PCR法检测呼吸道合胞病毒
目的建立快速、敏感、特异的人呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)检测方法.方法根据RSV F基因的保守序列设计3条引物,建立半巢式RT-PCR(semi-nested RT-PCR)检测方法.用该方法检测125例患急性下呼吸道感染的婴幼儿的鼻咽吸引物(nasopharyngeal aspirates,NPA)标本,同时对标本进行病毒分离和直接免疫荧光法检测.结果该半巢式RT-PCR灵敏度为0.1TCID50,用该方法在125例标本中共检出RSV阳性标本63例,阳性率50.4%.结论建立快速、敏感、特异的RSV半巢式RT-PCR检测方法,该方法适用于临床早期诊断和流行病学监测.
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病毒性脑炎患者肠道病毒71型的分离与鉴定
目的:探讨肠道病毒71型在病毒性脑炎的病原学地位,进而建立快速诊断肠道病毒71型感染的实验室方法.方法:采用病毒分离和半巢式RT-PCR法对88例病毒性脑炎患者的脑脊液进行EV-71检测.结果:88例患者中EV-71病毒分离阳性8例.以病毒核酸为模板进行半巢式RT-PCR反应,结果扩增片断长度为226个碱基对的片段.阳性标本结果与同样条件下来自EV-71病毒BrCr株的分离结果相同.结论:通过病毒分离和半巢式RT-PCR的比较表明,半巢式RT-PCR技术与传统的组织培养法相比,快速、敏感性高且具有相同的特异性.
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采用半巢式RT-PCR检测兰州地区住院肺炎患儿下呼吸道分泌物中的RSV
从人呼吸道合胞病毒(hRSV)基因序列中高度保守的N基因处,设计了特异性半巢式引物,以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法随机检测了46份兰州地区2007年春季住院肺炎患儿下呼吸道分泌物样本.结果46份样本中有19份扩增出了预期目的片段,对所有扩增产物进行基因序列测定.结果表明19份样本均有RSV感染,其检出率为41%,而且序列分析结果显示,所有RSV阳性样本均与RSV A亚型的同源性高于B亚型.
