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L5178Y和WTK1细胞微核试验在抗诱变测试中的应用
为了研究L5178Y和WTK1细胞应用于抗诱变测试系统的可靠性和有效性,按维生素C(Vc)和叶绿酸铜钠(Chl)与丝裂霉素C(MMC)的加入顺序,分为同时处理、预处理和后处理三种处理方式,观察Vc和Chl对MMC诱导两种细胞微核的抑制作用.结果表明:①Vc和Chl本身无诱导两种细胞微核的作用;②Vc与MMC同时处理和预处理,能显著降低MMC诱导的两种细胞微核率;③0.12mg/ml Chl与MMC同时处理和预处理,能显著降低MMC诱导的两种细胞微核率,但0.06mg/ml同时处理和预处理仅能显著降低MMC诱导的WTK1细胞微核率.后处理方式对微核反应无抑制作用.该研究结果与Vc和Chl在其它抗诱变试验中的结果基本一致,表明L5178Y和WTK1细胞微核试验在抗诱变作用检测方面有较好的应用价值.
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WTK1细胞tk基因突变的多重PCR分析
目的 探讨WTK1细胞tk位点自发和诱发突变体的突变谱和突变热点.方法 用甲磺酸甲酯、丝裂霉素C和叠氮钠染毒WTK1细胞后,筛选出tk基因突变集落,用多重PCR方法对WTK1细胞tk基因突变谱进行分析.结果 三种受试物均能诱导WTK1细胞tk位点突变频率增高,且存在剂量-反应关系;所分析的突变体中绝大部分缺失tk基因外显子4和5-7.结论 三种受试物对WTK1细胞均有致突变作用;tk位点的突变存在明显的突变热点.
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tk基因突变的分子机制研究
胸苷激酶 (Thymidine kinase, tk)基因突变试验是对外源性化学物质进行遗传毒性检测的短期试验方法.该方法可检测出染色体 tk位点的点突变、基因缺失以及染色体畸变等多种类型的遗传损伤.遗传毒性物质作用于 tk位点产生大、小两种突变体,对应着不同的突变机制.杂合子丢失的产生机制和 P53基因的作用机制是近年来研究的热点.
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甲基磺酸甲酯诱发WTK1细胞tk位点突变试验方法的建立
目的: 建立WTK1细胞t k基因突变试验方法,为毒理学评价和机制的研究提供实验依据. 方法: 用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)处理WTK1细胞,检测t k位点突变率和细胞p53基因蛋白表达水平的改变. 结果: MMS可诱导WTK1细胞t k位点突变率增加,MMS的处理剂量达到10 mgL-1时,t k位点突变率为985.2 / 10 6个细胞,并有剂量反应关系.诱发突变率约是自发突变率3～10倍. 在t k位点诱发了两种不同表型的突变集落,即正常生长突变体(t k-NG mutant)和慢生长突变体(t k-SG mutant),但以慢生长突变体为主. MMS处理后,WTK1细胞P53蛋白的表达水平增高. 结论: MMS可以诱发WTK1细胞t k位点的突变率增加,MMS处理细胞后,P53蛋白的表达水平增高,说明WTK1细胞的P53蛋白的功能尚未丧失.该方法的建立,为进一步开展t k基因突变试验,评价环境化学物的诱变性奠定了基础.
