首页 > 文献资料
-
慢病毒介导的稳定沉默MyD88基因的胰腺导管细胞株的建立
目的 建立稳定沉默髓样分化因子88基因(MyD88)的大鼠胰腺导管细胞株ARIP.方法 设计并构建编码MyD88 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并用三质粒包装系统包装成慢病毒,分别命名为Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2.将ARIP分为未处理组、Lenti-Non Target阴性对照组、Lenti-shMyD88-1组和Lenti-shMyD88-2组.并用相应的病毒转导(未处理组只换液).经流式分选和抗生素筛选结合的方法筛选绿色荧光蛋白阳性细胞,测定细胞的转导效率并用real-time PCR方法测定沉默效率.结果 成功构建了编码表达MyD88的shRNA表达质粒.经流式分选和抗生素筛选后,慢病毒转导效率均达到100%.与未处理组相比,Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2对MyD88 mRNA的沉默效率分别为82.73%±1.203%和75.56%±1.176%.结论 建立了MyD88基因稳定沉默的胰腺导管细胞株.为探讨MyD88基因与急性胰腺炎的相关性提供了一个全新的、稳定的、可操作的细胞模型.
关键词： 髓样分化因子88(MyD88) 慢病毒 RNA干扰 急性胰腺炎 ARIP -
人胎盘胎儿来源间充质干细胞通过下调髓样分化因子88和转化生长因子β信号通路减轻小鼠肺纤维化
目的 探讨无血清培养人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hfPMSC)对博来霉素所致小鼠肺纤维化的疗效及分子机制.方法 培养并采用流式细胞术鉴定hfPMSC,取无特定病原体级雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为博来霉素组、hfPMSC治疗组和阴性对照组.博来霉素组和hfPMSC治疗组分别经气管内注入50 μL博莱霉素(1 g/L)制备肺纤维化模型,阴性对照组经气管内注入50 μL PBS.hfPMSC治疗组,在造模3d后,经尾静脉注射200 μL含5×105个hfPMSC.第21天全部处死各实验组小鼠,取肺组织进行HE染色、Masson染色以及胶原蛋白含量测定;提取各组肺组织总蛋白,Western blot法检测髓样分化因子88(MyD88)、转化生长因子β(TGF-β)的表达;ELISA检测各组血清中TGF-β的浓度.结果 所培养具有典型的间充质干细胞形态特征并表达表面标志分子CD73、CD90和CD105,而不表达CD14、CD34和CD45.与博来霉素组比较,HE和Masson染色显示,hfPMSC治疗组可显著性降低肺组织纤维化程度、降低肺组织胶原蛋白含量以及MyD88和TGF-β蛋白水平.结论 hfPMSC可通过MyD88下调TGF-β的表达减轻小鼠肺纤维化.
