首页 > 文献资料
-
疟原虫新型恒温扩增快速筛检方法的研究
目的 建立可现场使用的疟原虫快速检测方法,为检验检疫基层实验室开展筛检和监控工作提供技术手段.方法 通过合成特异引物和探针,系统筛选,优化恒温扩增条件,建立疟原虫核酸等温扩增方法,用免疫层析试纸条快速检测扩增产物,并测试其灵敏度和特异性.结果 疟原虫交叉引物恒温扩增方法灵敏度达到103拷贝/ml,反应特异,操作简便,不需要特殊设备,3h可报告结果.结论 本研究应用交叉引物恒温扩增技术(CPA)对疟原虫的核酸进行扩增,并应用试纸条检测技术检测核酸扩增产物,检测时间短,具有一定的应用价值.
关键词： 疟原虫 快速检测 交叉引物恒温扩增技术 研究 -
交叉引物恒温扩增技术在副溶血性弧菌毒力基因检测中的应用
目的 建立一种快速检测副溶血性弧菌耐热直接溶血素(TDH)和不耐热溶血素(TLH)的CPA-核酸试纸条法.方法 根据副溶血性弧菌的TDH和TLH毒力基因序列设计特异性引物和探针,通过对反应体系进行优化,确立佳反应温度和时间,并将CPA方法与荧光定量PCR法进行比较与评价.结果 本研究建立的CPA-核酸试纸条法佳反应温度和时间为60℃40 min,对副溶血性弧菌的TDH和TLH毒力基因检测具有高度特异性,对副溶血性弧菌的TLH和TDH检出极限分别为1.8 cfu/ml和16.0 cfu/m,与荧光定量PCR法一致;而且具有较好的稳定性.464株菌株中检出副溶血性弧菌TLH和TDH基因阳性率分别为100％(464/464)和72.6％(337/464),其中,水产品中分离株TDH毒力基因阳性率为7.81％ (10/128);临床标本分离株TDH毒力基因阳性率为97.32％ (327/336).结论 该方法检测副溶血性弧菌TLH和TDH基因,具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点,可用于副溶血性弧菌的现场快速检测.
关键词： 副溶血性弧菌 交叉引物恒温扩增技术 毒力基因 -
交叉引物恒温扩增法检测甲型 H1N1流感病毒及临床应用
目的：建立交叉引物恒温扩增（Cross Priming Amplification ，CPA ）技术对甲型 H1N1流感病毒进行检测的方法，并对该方法通过临床标本进行评价。方法根据甲型H1N1流感病毒的保守序列设计特异性引物，并在同一温度下实现RNA的逆转录和DNA扩增，该扩增产物可通过全封闭式核酸检测装置进行检测。14份健康人咽拭子标本、7个其他呼吸道病毒和6个虫媒病毒株被用来检测CPA反应的特异性；已知病毒滴度的甲型 H1N1毒株进行对照梯度稀释，以测试CPA的敏感性；102份甲型H1N1临床咽拭子标本为检测对象，评估其临床的检测的可行性。结果 CPA反应未出现对健康样本以及其他病毒产生交叉反应；对已知滴度的病毒进行梯度稀释检测，证明CPA的敏感性为10拷贝／μL 。对甲型 H1N1流感临床病例发病1～3 d临床标本新建检测方法的检出率为100％，4～6 d临床标本检出率为79．31％，≥7 d临床标本检出率为9．09％。讨论 CPA具有较高的敏感性、特异性，对设备要求低，适合基层医疗单位对甲型H1N1流感发病早期诊断使用。
关键词： 甲型 H1N1流感病毒 交叉引物恒温扩增技术 临床应用 -
交叉引物恒温扩增结合免疫金标方法检测副溶血性弧菌
目的 用交叉引物恒温扩增技术(CPA)结合免疫金标方法快速检测副溶血性弧菌.方法 用加热煮沸方法提取菌株和标本的DNA;对CPA方法进行敏感性和特异性检测,并和荧光定量PCR方法进行比较;并用建立的方法对模拟牡蛎样本进行检测.结果 该方法60℃40 min即可完成反应,且敏感性和特异性高,14株副溶血性弧菌检测结果均阳性;低检测限为1.8 cfu/ml,模拟样本的检测限达到180 cfu/g.与荧光定量PCR检测结果一致.结论 该方法具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,特别适合在基层实验室和现场快速检测.
关键词： 副溶血性弧菌 交叉引物恒温扩增技术 核酸试纸条 快速检测
