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基于随机扩增多态性DNA分析的霍乱弧菌分子分型方法的建立
目的 建立基于随机扩增多态性DNA分析(Randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)的霍乱弧菌简便快速分子分型方法.方法 选择16株霍乱弧菌代表性菌株,包括O1群、O139群和非O1/非O139群等血清群,通过40条随机引物的RAPD-PCR实验,筛选出理想的随机引物,要求其产生的DNA指纹图谱多态性高,并有足够的分辨力进行分子分型.结果 通过一系列RAPD-PCR实验和统计学聚类分析,从40条随机引物中筛选出2条符合要求的引物.16株霍乱弧菌的分析结果显示,2条引物对于O1群和O139群产毒株、O1群非产毒株和非O1/非O139群均有很好的聚类分辨率.结论 本研究筛选获得了2条随机引物并建立了基于RAPD的分子分型方法,该方法简便、省时、省力,适用于地方疾控部门和口岸检疫部门的基层实验室开展霍乱监测和流行病学溯源工作.
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应用RAPD技术鉴别微生态菌种
目的:建立应用RAPD技术鉴别微生态菌种的方法,提高菌种鉴别水平.方法:应用RAPD(随机扩增多态性)方法,选用5条随机引物,利用PCR方法,对3株长双歧杆菌,3株嗜酸乳杆菌,3株粪肠球菌进行基因组DNA指纹图谱分析.结果:发现不同菌株扩增的DNA片段的大小、数量是有差异的.结论:此方法具有可重复性,方便、快速和准确的优势,可用于微生态制剂生产用菌株的鉴别.
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小鼠基因组RAPD-PCR反应条件的优化与筛选
目的筛选优化小鼠RAPD-PCR反应体系及扩增程序.方法以2条引物对4个品系的小鼠基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD-PCR,分析比较扩增结果.结果扩增结果较好的反应体系及扩增程序如下:在25ml的反应体系中含有10×buffer2.5μl,dNTP 200mmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,引物0.2 mmol/L,Taq酶1.25 U,扩增程序为94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸90 s,40个循环后72℃延伸5 min.结论这一反应体系和扩增程序在我们实验室得到了较好的扩增效果.
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O139群霍乱弧菌地方分离株的分子特征研究
目的研究本地分离出的O139群霍乱弧菌的分子特征,建立霍乱暴发和散发的快速检测及流行病学溯源的有效手段.方法采用PCR方法对霍乱弧菌进行4种毒力基因的检测,用随机扩增多态性分析(RAPD)及SPSS软件对以上菌株进行多态性分析,对霍乱弧菌毒力进行快速测定和分子分型.结果 5株O139群霍乱弧菌均可检出四种毒力基因.所有霍乱弧菌的RAPD结果经聚类分析可分为3个聚类群,较好地反应了不同群的霍乱弧菌之间的亲缘关系.结论可将PCR和RAPD方法结合分析用于霍乱疫情的快速检测和流行病学溯源.
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一起由副溶血弧菌引起的食物中毒的实验室检测
目的:对一起可疑食物中毒的病原菌相关实验室检测.方法:参照GB/T7489、WS/T.9-1996对食物中毒患者肛拭子进行致病菌检测,并对分离的可疑致病菌进行毒力基因检测、随机扩增多态性分析(RAPD)和药敏试验.结果:11份患者肛拭标本中,8份(占72.7%)分离出副溶血弧菌,血清分型均为03:K6;毒力基因检测为tdh阳性,trh阴性;RAPD结果显示,8株副溶血弧菌具有相似的RAPD图谱.结论:结合流行病学资料、可疑致病菌检测、毒力基因检测及随机扩增多态性分析结果,证实该起食物中毒是由副溶血弧菌引起,致病毒素主要为tdh编码的TDH.
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副溶血性弧菌食源性疾病分离株的RAPD分子分型研究
目的:探讨副溶血性弧菌食源性疾病分离株的基因多态性.方法:采用随机扩增多态性分析(RAPD)对副溶血性弧菌食源性疾病分离株进行分子分型,结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图,对菌株进行基因多态性分析.结果:所采用引物能从副溶血性弧菌扩增出特异性的DNA条带,分型效果较好,所有46株副溶血性弧菌中大部分的RAPD结果经聚类分析可分为3个主要聚类群,较好地反应了不同血清型和不同来源菌株的亲缘关系.结论:可应用RAPD方法进行食源性疾病的流行病学调查和溯源.
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产ESBLs大肠埃希菌随机扩增多态性分析
目的 对产ESBLs菌的耐药现状进行分析研究,对耐药菌株进行基因分型流行病学研究.方法 对临床分离的50株大肠埃希茵根据CLSI标准进行初筛:和确证实验,对产ESBLs菌运用随机扩增多态性分析(RAPD)进行相似性分析.结果 本院产ESBLs大肠埃希菌检出率为22%,氨苄西林抗生素抗性达到80%,GC含量为60%的引物适用于大肠埃希茵的随机扩增分析,11株产ESBLs菌运用RAPD技术可分为10种基因型,其中相同基因型别的2株菌来自同一科室.结论 RAPD技术运用于产ESBLs菌的相似性分型具有经济、快速、可靠的特点.
