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结核分枝杆菌重组EIS蛋白血清学诊断价值的研究
目的研究结核分枝杆菌重组EIS蛋白的抗原性,观察抗结核化疗对抗EIS抗体滴度影响,初步探讨EIS蛋白作为血清诊断抗原在筛选活动性肺结核作用的可能性.方法采用基因工程方法表达纯化EIS抗原,以EIS为抗原建立酶联免疫方法,检测肺结核病人和健康对照者中抗EIS抗体的存在情况.对初次化疗的肺结核病人进行抗EIS抗体水平的随访,观察化疗对抗体反应的影响.结果肺结核病人抗EIS抗体的水平显著高于健康对照和肺部非肺结核疾病对照(P＜0.000 1),结核化疗对抗体反应的影响不大,在整个化疗过程中抗体水平无显著差别.结论 EIS抗体的检测可能有助于活动性肺结核的筛选.
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结核分枝杆菌eis基因及其编码蛋白的生物信息学分析
目的 获取结核分枝杆菌(H37Rv)的eis基因序列及其编码蛋白(Eis蛋白)的氨基酸序列,预测和分析该蛋白的结构和功能. 方法 从NCBI BenBank数据库获取eis基因及其编码蛋白序列,利用ORF Finger 工具分析eis基因的开放阅读框;利用Expasy PortParam、SignalP 4.0 Server、TMHMM Server V.2.0、SOPMA、BLAST、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI以及NetMHCIIpan 3.1 Server等软件对Eis蛋白的生物学特性进行预测分析. 结果 结核分枝杆菌eis基因全长1 164 bp,有7个开放阅读框,长一个被通读,编码387个氨基酸.Eis蛋白分子式C1870H2958N5 50O542S11,等电点(pI)为6.46,属于不稳定、疏水性蛋白;无跨膜区,信号肽切割位点位于第21位氨基酸处;二级结构预测无规则卷曲占30.23％,含有一个保守结构域;建立同源三级模型,GMQE为0.98;预测该蛋白至少含有6个B细胞优势抗原表位和14个优势CTL表位.优势抗原表位数个. 结论 生物学信息学方法预测结核分枝杆菌的Eis蛋白具有优势T、B细胞抗原性表位,所含保守结构域与其功能密切相关.eis基因以及Eis蛋白与结核分枝杆菌抑制细胞自噬及其耐药机制密切相关,可作为抗结核治疗的切入点.
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肺结核患者结核分支杆菌EIS抗原特异性细胞免疫的临床研究
目的探讨肺结核患者结核分支杆菌EIS抗原特异性细胞免疫水平与病情的关系.方法选择30例初治、痰涂片结核杆菌阳性的活动性肺结核患者,采用比色法测定其外周血淋巴细胞对结核分支杆菌EIS抗原的增殖反应,酶联免疫吸附法测定细胞分泌的γ-干扰素(IFN-γ)及白细胞介素-10(IL-10)的水平,并与20名健康对照者和16例康复的肺结核患者进行比较.结果康复者对EIS的细胞免疫为强烈,其外周血淋巴细胞的细胞增殖强度显著高于健康对照者和活动性肺结核患者(P均＜0.01).活动性肺结核患者外周血淋巴细胞在受到EIS刺激时分泌的IFN-γ显著低于康复者(P＜0.05).EIS抗原刺激主要诱导细胞分泌Th2型细胞因子IL-10.结论活动性肺结核患者对EIS抗原的细胞免疫水平低下,经抗结核治疗康复后,细胞免疫维持在较高水平.EIS抗原诱导Th1/Th2免疫失衡可能是EIS参与结核发病的机制之一.
