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MicroRNA-203抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的机制研究
目的 探讨microRNA-203(miR-203)对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响及机制.方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定miR-203在正常成骨细胞hFOB及骨肉瘤细胞系中的表达,将MG-63细胞系分成miR-203组、Scramble组、RAB22A组、NC组,Lipofectamine 2000分别转染miR-203 mimics、Scrambles、pcDNA3.1-RAB22A、空白对照质粒;通过噻唑蓝(MTT)实验测定增殖能力,细胞划痕实验测定迁移能力;通过Target Scan和双荧光素酶实验预测及验证miR-203与RAB22A基因的靶向调节关系;RT-PCR测定RAB22A mRNA表达水平;Western blot测定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平.结果 miR-203在骨肉瘤细胞系SAOS-2、SOSP-9607、U2OS及MG-63中较hFOB细胞系表达降低.MTT显示,在培养48和72 h后,miR-203组相对细胞数少于Scramble组(P<0.05);培养24 h后,Scramble组细胞相对划痕面积小于miR-203组(P<0.05);双荧光素酶实验示,miR-203与RAB22A基因存在靶向调节关系.RAB22A组相对划痕面积小于NC组(P<0.05);MTT显示,在培养24、48和72 h后,RAB22A组相对细胞数多于NC组(P<0.05);RAB22A组与NC组比较,E-cadherin下调表达,N-cadherin上调表达,Vimentin上调表达.结论 miR-203通过下调RAB22A基因表达,抑制上皮间质转化,进而抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移.
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miRNA-30b对抑制胃癌细胞增殖及侵袭的作用研究
目的 研究miRNA-30b在胃癌癌组织中的表达水平及对癌细胞增殖侵袭的影响,探讨miRNA-30b在胃癌中的临床意义及可能的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-30b在胃癌及癌旁组织中的表达情况;用miRNA-30b模拟物及抑制物转染人胃癌HGC-27细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,Transwell小室法检测细胞侵袭情况,Western blot检测RAB22A和USP47蛋白表达.结果miRNA-30b在胃癌组织中表达水平低于对应癌旁组织(<0.05),且miRNA-30b低表达与胃癌分期及肿瘤大小有关(<0.05);与转染阴性对照细胞比较,转染miRNA-30b模拟物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力均受到抑制(<0.05),RAB22A和USP47蛋白表达水平降低(<0.05);而转染miRNA-30b抑制物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力则增强(<0.05),RAB22A和USP47蛋白表达水平升高(<0.05).结论 miRNA-30b在胃癌组织中表达下调,且miRNA- 30b可能通过调节RAB22A和USP47的表达从而影响胃癌细胞的增殖及侵袭.
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RAB22A在乳腺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨RAB22A在乳腺癌组织中的表达及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR检测60例乳腺癌及其相应癌旁组织中RAB22A mRNA的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系.结果 RAB22A mRNA在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(4.9±1.1 vs 1.1±0.3,P＜0.01).不同年龄、肿瘤大小以及不同ER、PR、HER-2表达状况乳腺癌患者中RAB22A mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05),但不同淋巴结转移数患者RAB22A mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05),高表达RAB22A患者的总生存期较低表达患者差(P＜0.05);多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示RAB22A和淋巴结转移数是影响预后的独立因素(P＜0.05).结论 RAB22A在乳腺癌组织中表达升高,可能与乳腺癌转移和不良预后有关.
