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靶向siRNA干扰hIAP-2联合姜黄素抑制肾癌GRC-1细胞增殖的实验研究
目的 应用hIAP-2特异性siRNA干扰肾癌GRC-1细胞hIAP-2基因的表达,探讨siRNA-hIAP-2联合姜黄素对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外化学合成针对hIAP-2的siRNA,通过阳离子脂质体将siRNA-hIAP-2转染肾癌GRC-1细胞,实时荧光定量PCR检测hIAP-2 mRNA表达水平,免疫印迹检测其蛋白表达水平,MTT法及流式细胞术分别测定siRNA-hIAP-2联合姜黄素处理后对肾癌GRC-1细胞增殖及凋亡的影响.结果 靶向hIAP-2的siRNA可以有效抑制肾癌GRC-1细胞的hIAP-2的表达,siRNA-hIAP-2和姜黄素均可抑制GRC-1细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡,当联合应用靶向hIAP-2的siRNA和姜黄素时,上述作用显著增强(P<0.05).结论 体外化学合成的siRNA-hIAP-2可以有效抑制肾癌GRC-1细胞的hIAP-2的表达,并能显著增强姜黄素诱导肾癌细胞GRC-1凋亡的敏感度,提示hIAP-2可作为姜黄素治疗肾癌的有效增敏靶点.
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hIAP-2-siRNA对hepG2肝癌细胞抑制作用
目的 合成凋亡抑制蛋白(hIAP-2) 的si-RNA,观察其对hepG2 细胞增殖、凋亡的影响.方法 化学合成三条hIAP-2-siRNA 干扰片段并用脂质体法转染hepG2 细胞,同时设立脂质体对照.RT-PCR 和western blotting 检测hIAP-2-siRNA 作用后hIAP-2 mRNA 和蛋白的表达,MTT 检测细胞增殖,AV-PI 流式细胞术检测细胞的凋亡.结果 RT-PCR 及Western blootting 检测显示3 条siRNA 均能有效抑制hIAP-2 mRNA 及蛋白表达(P<0.05),以siRNA 1 作用效果显著(P<0.05).MTT 检测显示hIAP-2-siRNA 80 nmoL·L-1 终浓度转染后的hepG2 细胞的增殖受到显著抑制(P<0.01),其中以80 nmoL·L-1 转染72 h 时增殖性下降明显(P<0.01).流式细胞术检测结果显示hIAP-2-siRNA 转染hepG2 细胞后凋亡率增加(P<0.05).结论 hIAP-2-siRNA 可明显抑制该肿瘤细胞的增殖,促进hepG2 肝癌细胞的凋亡.
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抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强抗肿瘤药物的抑癌作用
目的 探讨抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强对肿瘤化疗药物抑癌作用的影响.方法 采用MTT法检测mU6/hIAP-2质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用.结果 比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒mU6/hIAP-2与化疗药物顺铂、环磷酰胺或5-氟尿嘧啶合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异有统计学意义(P<0.01),但与秋水仙碱合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶的抗癌性能具有协同增强作用(二者合用效应Q值均≥1),但对靶向微管的药物秋水仙碱具有拮抗作用(Q值<1).结论 在敲除乳腺癌细胞中人凋亡抑制蛋白-2功能的基础上进行药物化疗,可能是乳腺癌治疗的一个新的可行方向.
