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基于p38MAPK-CRYAB途径探讨8-O-乙酰山栀子苷甲酸对急性心肌梗死大鼠的影响及作用机制
目的 基于p38 MAPK-CRYAB途径探讨8-O-乙酰山栀子苷甲酸对急性心肌梗死大鼠的影响及作用机制.方法 采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死大鼠模型,取50只造模成功的雄性SD大鼠随机分为模型组、阳性对照组、8-O-乙酰山栀子苷甲酸低、中、高剂量组,每组10只,另选10只作为空白对照组.空白对照组与模型组均给予等体积生理盐水,阳性对照组给予阿司匹林肠溶片[100 mg/(kg·d)],8-O-乙酰山栀子苷甲酸低、中、高剂量组分别给予8-O-乙酰山栀子苷甲酸[10、20及30 mg/(kg·d)],连续给药14天.检测大鼠心功能;HE染色法观察大鼠心肌组织病理变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;ELISA检测SOD、LDH、GSH-Px和MDA水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达;Western blot检测p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-CRYAB/CRYAB表达.结果 8-O-乙酰山栀子苷甲酸可显著改善急性心肌梗死大鼠的心功能及心肌组织病理变化(P＜0.05),降低心肌细胞凋亡率(P＜0.05),减轻氧化应激损伤(P＜0.05),上调抑凋亡基因Bcl-2表达,下调促凋亡基因Bax和Caspase-3表达(P＜0.05),促进p38 MAPK和CRYAB磷酸化(P＜0.05),但各组间p38 MAPK和CRYAB蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论 8-O-乙酰山栀子苷甲酸可显著改善急性心肌梗死大鼠心肌损伤症状,上调Bcl-2表达,下调Bax和Caspase-3表达,促进p38 MAPK和CRYAB磷酸化,其作用机制可能与p38 MAPK-CRYAB途径有关.
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8-O-乙酰山栀子苷甲酸对慢性炎性痛模型大鼠脊髓背角内HDAC1～5表达的影响及与JAK2-STAT3信号通路的关系研究
目的:研究8-O-乙酰山栀子苷甲酸(8-OaS)对慢性炎性痛模型大鼠脊髓背角内组蛋白去乙酰化酶1～5(HDAC1～5)表达的影响及与Janus激酶2-信号转导与转录活化因子3(JAK2-STAT3)信号通路的关系.方法:取SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组(生理盐水)、完全弗氏佐剂(CFA)组(生理盐水)和8-OaS低、中、高剂量组(2、20、200μg/kg),每组6只,除正常对照组和假手术组外,其余各组大鼠左侧后足趾侧皮下注射CFA复制慢性炎性痛模型,建模后腹腔注射相应药物,每日1次,连续7 d.采用热辐射法检测首次给药第1、2、3、4、5、6、7、8、11、15天大鼠的缩足潜伏期.另取大鼠按上述后5组方法进行分组给药,采用Western blot法检测大鼠末次给药后腰膨大节段脊髓背角中HDAC1～5、磷酸化JAK2(pJAK2)、磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白表达情况.再另取大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、CFA组(生理盐水)、8-OaS组(20μg/kg)和JAK2-STAT3的拮抗药α-氰基-(3,4-羟基)-N-苄苯乙烯胺(AG490)组(8 mg/kg),每组6只,同上法复制IP模型后腹腔注射相应药物,每日1次,连续7 d,采用免疫荧光组织化学染色观察各组大鼠HDAC5和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在脊髓背角的表达情况.结果:与正常对照组和假手术组比较,其余各组大鼠的缩足潜伏期均明显缩短(P<0.05);与CFA组比较,8-OaS低、中、高剂量组大鼠的缩足潜伏期均明显延长(P<0.05),且呈剂量依赖性.与假手术组比较,CFA组大鼠脊髓背角中HDAC1～5、pJAK2、pSTAT3蛋白表达均明显增强(P<0.05);与CFA组比较,8-OaS低、中、高剂量组大鼠脊髓背角中HDAC5、pJAK2、pSTAT3蛋白表达均明显降低(P<0.05),但HDAC1～4蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05).HDAC5大量表达于星形胶质细胞上,与假手术组比较,CFA组大鼠脊髓背角中GFAP和HDAC5表达均明显增强(P<0.05);与CFA组比较,8-OaS组和AG490组大鼠脊髓背角中GFAP和HDAC5表达均明显降低(P<0.05).结论:8-OaS可有效缓解由CFA诱导的慢性炎性痛,其机制可能与下调脊髓背角中HDAC5表达和JAK2、STAT3的磷酸化水平有关.
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8-O-乙酰山栀子苷甲酸通过抑制脊髓背角JNK的磷酸化水平改善大鼠炎性痛的研究
目的:探究8-O-乙酰山栀子苷甲酸(8-O-acetyl-SM,8-OaS)对于慢性炎性痛模型大鼠痛行为及脊髓背角星形胶质细胞内c-Jun氨基酸末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平的影响.方法:运用大鼠足底注射完全弗式佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)的方法建立慢性炎性痛模型;通过腹膜腔注射8-OaS进行干预;采用yon Frey丝测定大鼠足底50％机械性缩足反射阈值;应用免疫荧光组织化学染色法观察大鼠腰膨大节段脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及磷酸化的JNK(phosphorylatedc-Jun N-terminal kinase,pJNK)表达;应用Western Blot方法对大鼠脊髓背角内GFAP、JNK以及p-JNK的表达水平进行定量分析.结果:(1)行为学结果显示:与对照组相比,CFA模型大鼠机械性痛阈明显降低(P＜0.01),腹膜腔注射8-OaS可有效提高CFA诱导的机械性痛阈值(P＜0.05);(2)免疫荧光染色结果显示:CFA模型脊髓背角内GFAP的表达量明显高于正常组,且pJNK基本表达予星形胶质细胞内;(3)Western Blot结果显示:与对照组相比,CFA造模后7d脊髓背角内GFAP和pJNK表达明显上调,腹膜腔给予8-OaS可以显著下调CFA诱导的脊髓背角内GFAP和pJNK的水平(P＜0.01).结论:腹膜腔内给予8-OaS可有效提高炎性痛大鼠的机械性痛阈,其机制是通过下调脊髓背角星形胶质细胞内JNK信号通路的磷酸化水平进而抑制星形胶质细胞的激活.
关键词： 8-O-乙酰山栀子苷甲酸 炎性痛 完全弗式佐剂 c-Jun氨基酸末端激酶 大鼠
