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MMP-9及TIMP-1在碱烧伤小鼠角膜中的表达
目的探讨角膜烧伤后基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其组织型抑制剂(tissue inhibitor of metallopoteinase 1,TIMP-1)在小鼠角膜中的表达及意义.方法采用1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤昆明小鼠角膜,建立角膜碱烧伤动物模型;用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后不同时间点MMP-9及TIMP-1在角膜中的分布及其积分吸光度(A)值.结果小鼠角膜碱烧伤后第2 d炎性细胞增多,第7 d炎症达到高峰,21 d后基本消失.小鼠角膜上皮层、基底膜、以及基质层中大量炎性细胞和新生血管内皮细胞均有MMP及TIMP-1表达.角膜中MMP-9在第2 d出现表达,第7 d达高峰,以后逐渐降低;TIMP-1开始表达不明显,第7 d出现表达,14 d达高峰,以后逐渐降低.结论小鼠碱烧伤模型炎症早期MMP-9活性增高,继而TIMP-1分泌增多,MMP-9活性受抑,炎症减轻.提示MMP-9可能是参与碱烧伤角膜溃疡形成、角膜融解及纤维化的重要调控因子,而TIMP-1则在炎症的抑制过程中发挥了重要作用.
关键词： 基质金属蛋白酶9 组织型基质金属蛋白酶抑制剂1 免疫组织化学 -
MMP-9/TIMP-1在HHcy致ApoE-/-小鼠肾脏损伤中的作用机制
目的 探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)导致ApoE-/-小鼠肾脏损伤的作用机制,为HHcy所致肾脏疾病的预防和治疗提供理论和实验依据,为肾病患者的疾病监测提供新的指标.方法 将5周龄雄性纯合子ApoE-/-小鼠随机分组:ApoE--对照组饲以普通饮食,ApoE-/-高蛋氨酸组饲以高蛋氨酸饮食,ApoE-/-干预组饲以加叶酸和维生素B12的高蛋氨酸饮食,5周龄SPF级C57BL/6J雄鼠饲以普通饮食作为正常对照组,喂养14周后,生化分析仪测定血清同型半胱氨酸(Hcy)、肌酐及尿素浓度,透射电镜和PAS染色检测小鼠肾脏损伤情况,荧光定量PCR检测肾脏基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)mRNA表达水平,并以免疫组织化学染色法分析肾脏MMP-9蛋白表达,ELISA检测TIMP-1蛋白表达.结果 与正常对照组相比,ApoE-/-高蛋氨酸组血清Hcy、肌酐及尿素浓度分别升高了3.66倍、1.1倍和1.6倍(P＜0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,ApoE-/-高蛋氨酸组较正常对照组肾脏损伤明显,荧光定量PCR结果显示MMP-9及TIMP-1 mRNA表达则分别升高了5.25倍和1.38倍(P＜0.01);免疫组织化学结果显示ApoE-/-高蛋氨酸组MMP-9表达较正常对照组明显升高(P ＜0.01);ELISA结果显示ApoE-/-高蛋氨酸组TIMP-1蛋白表达比正常对照组明显升高(P＜0.01).与ApoE-/-高蛋氨酸组相比,ApoE-/-干预组血清Hcy浓度下降,且肌酐和尿素浓度均降低(P＜0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,ApoE-/-干预组肾脏损伤较ApoE-/-高蛋氨酸组减轻.血清Hcy浓度与其肌酐及尿素浓度呈正相关(r2=0.4344,P＜0.0001;r2 =0.4478,P＜0.0001),与MMP-9/TIMP-1比值也呈正相关(r2=0.39309,P＜0.001),且小鼠肾脏MMP-9/TIMP-1比值与肌酐及尿素浓度也成正相关(r2=0.1464,P＜0.05;r2=0.3027,P＜0.01).结论 HHcy可能是经MMP-9/TIMP-1比例上调致细胞外基质降解,继而导致肾脏损伤.
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冠心舒通胶囊对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块内MMP-9和TIMP-1表达的影响
目的 观察中成药冠心舒通胶囊对高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化斑块病理变化、人组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响,探讨冠心舒通胶囊对粥样斑块稳定性的影响以及对相关机制进行初步研究.方法 将8周龄雄性ApoE-/-小鼠30只给予高脂喂养,12周时随机分为:模型组、冠心舒通胶囊高剂量[1.8 g/(kg·天)]组和冠心舒通胶囊低剂量[0.6g/(kg·天)]组,喂养12周后处死,取主动脉中段,大体标本油红O染色观察斑决面积,冰冻切片后HE染色观察斑块厚度,冰冻切片免疫荧光法检测斑块内TIMP-1、MMP-9表达情况.结果 与模型组相比,冠心舒通胶囊组平均斑块浸润面积减小(P＜0.05),弥漫程度减轻,斑块厚度降低,MMP-9表达减少,而且冠心舒通胶囊高剂量组与低剂量组相比,各项统计指标亦有统计学意义(P＜0.05),TIMP-1表达未见明显变化.结论 冠心舒通胶囊可以对抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的形成和进展,以及通过降低斑块内MMP-9表达,从而抑制胶原纤维分解,稳定易损粥样斑块.
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黄酒多酚对LDLR-/-小鼠MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达和动脉粥样硬化斑块的影响
目的 观察黄酒是否可以通过黄酒多酚发挥对动脉粥样硬化斑块的抑制作用并探讨其可能机制.方法 40只6周龄雄性低密度脂蛋白受体敲除(LDLR-/-)小鼠,高脂饲料喂养诱导形成动脉粥样硬化模型,随机分为高脂对照组、瑞舒伐他汀组、黄酒多酚10 mg/(kg·d)组、黄酒多酚30 mg/(kg·d)组和黄酒多酚50 mg/(kg·d)组,每组8只,分别予以无菌水、10 mg/(kg·d)瑞舒伐他汀和10、30、50 mg/(kg·d)黄酒多酚干预.16周后处死小鼠,检测血脂,观察胸腹主动脉粥样硬化情况,Western blot测定胸主动脉组织内基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达,明胶酶谱法测定主动脉弓动脉粥样硬化处MMP-2和MMP-9的活性.结果 与高脂对照组相比,总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)在黄酒多酚组和瑞舒伐他汀组明显下降(P＜0.01),甘油三酯(TG)在瑞舒伐他汀组明显下降(P＜0.01),在黄酒多酚组差异不明显(P＞0.05),在黄酒多酚组与瑞舒伐他汀组差异明显(P＜0.05);5组间高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平差异无统计学意义(P＞0.05).与高脂对照组相比,主动脉粥样硬化面积在瑞舒伐他汀组和黄酒多酚10、30、50 mg/(kg·d)组分别减少74.14％、18.51％、40.09％、38.42％ (P＜0.01),不同浓度黄酒多酚组主动脉粥样硬化面积与瑞舒伐他汀组比较差异显著(P＜0.01).黄酒多酚和瑞舒伐他汀均能明显抑制MMP-2、MMPO的表达和活性(P＜0.01),增强TIMP-1、TIMP-2的表达(P＜0.01).结论 黄酒多酚具有类似瑞舒伐他汀的作用,能够调节血脂,在抑制MMP-2、MMP-9表达和活性的同时增强TIMP-1、TIMP-2的表达,减轻动脉粥样硬化斑块的形成,这可能是黄酒对心血管系统的保护机制之一.
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丹参酮ⅡA对川崎病并发冠状动脉损害患儿基质金属蛋白酶9及其抑制剂TIMP-1的影响
目的 检测不同的治疗方案下川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿治疗前后基质金属蛋白酶9(matrix mctalloproteinase-9,MMP-9)及组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的动态变化,分析丹参酮ⅡA(TanⅡA)对上述指标的影响以及对川崎病并发冠状动脉损害(coronary artery 1 esion,CAL)的保护作用.方法 将2010年4月至2012年9月在南华大学附属第二医院住院治疗的川崎病患儿48例,包括无冠状动脉损害28例,有冠状动脉损害20例.随机分为TanⅡA加常规治疗组和常规治疗组,各组24例(无冠状动脉损害14例,有冠状动脉损害10例),并以健康体检儿童作为对照组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测治疗前后患儿血清MMP-9、TIMP-1变化表达变化.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测治疗前后患儿外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC) MMP-9、TIMP-1 mRNA表达水平.结果 川崎病患儿治疗前MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达均较正常对照组显著升高,且有冠状动脉损害的川崎病患儿血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值明显高于无冠状动脉损害(no coronary artery l esion,NCAL)川崎病患儿(P＜0.05)；治疗5～7天后MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),其中TanⅡA加常规治疗组较常规治疗组MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达下降更明显(P＜0.05),同时,在有冠状动脉损害的川崎病患儿中,lanⅡA加常规治疗后,与常规治疗相比,其血清MMP-9、TIMP-1也明显降低(P＜0.05).结论 TanⅡA可以一定程度抑制川崎病患者MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达,从而减轻血管炎性损伤,减少川崎病并发冠状动脉损害.
关键词： 川崎病 丹参酮ⅡA 基质金属蛋白酶9 组织型基质金属蛋白酶抑制剂1 冠状动脉损害 -
急性冠状动脉综合征患者巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ及炎症相关因子的变化
目的 探讨急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ核因子κB、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的变化及其间的关系.方法 选取急性冠状动脉综合征患者48例、稳定型心绞痛患者22例为研究对象,抽取外周动脉血20 mL,分离单个核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子培养得单核细胞源性巨噬细胞;用CD40配体刺激后,酶联免疫吸附法测定上清液中基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1 mRNA表达,免疫组织化学法检测核因子κ亚单位P65表达.结果 急性冠状动脉综合征组过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达低于稳定型心绞痛组(0.24±0.04比0.39±0.06,P<0.001),核因子κ P65表达高于稳定型心绞痛组(0.42±0.06比0.27±0.02,P<0.001),基质金属蛋白酶9在上清液中的浓度及其mRNA表达明显高于稳定型心绞痛组(231.11±51.47μg/L比126.02±13.26μg/L和0.674±0.11比0.24±0.05,P<0.001),组织型基质金属蛋白酶抑制剂1在上清液中的浓度及其mRNA表达强度高于稳定型心绞痛组(139.80±31.54μg/L比112.25±12.68μg/L和0.42±0.09比0.33±0.06,P<0.05).过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达与核因子κ P65和基质金属蛋白酶9的表达强度呈负相关(P<0.001),与组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度不相关(P>0.05);核因子κ P65与基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度呈正相关(P<0.001).结论 急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达下调,核因子κ活性增强,基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达上调;过氧化体增殖物激活型受体γ可能通过调节核因子κ活性而调节基质金属蛋白酶9基因转录;但组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达可能不受过氧化体增殖物激活型受体γ调节.
