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Tara文献资料
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一个可能的与人端粒结合因子相互作用蛋白Tara的分离和克隆
目的:分离和鉴定端粒结合因子(TRF1)免疫共沉淀蛋白复合物并克隆其基因.方法:以TRF1抗体应用免疫共沉淀方法,从细胞蛋白抽提物中分离TRF1蛋白复合物,并作蛋白质肽指纹谱鉴定;应用温度梯度PCR,从人cDNA文库中扩增目的基因,并构建pEGFP-C2真核表达载体;核苷酸测序和Western blot验证目的基因序列和表达载体.结果:从TRF1免疫沉淀复合物中分离出了Tara蛋白;人cDNA文库中PCR扩增所得产物为1.7 kb,与Tara基因CDS序列同源性为99.9%;GFP/Tara融合蛋白约100 kD,Tara在间期HeLa细胞中弥散表达于胞浆,而有丝分裂细胞则定位于整个细胞.结论:Tara是一个可能的TRF1相互作用蛋白,其作用机制需进一步实验研究.
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Plk1磷酸化修饰Tara蛋白对HeLa细胞胞质分裂及增殖的影响
目的：探讨有丝分裂相关激酶Plk1磷酸化修饰Tara蛋白在调控HeLa细胞胞质分裂及增殖中的作用。方法：运用酵母双杂交、免疫共沉淀、体外沉降实验确定Plk1与Tara两种蛋白是否能够相互结合；采用体内外磷酸化实验明确Plk1对Tara蛋白的磷酸化修饰；采用免疫荧光实验及流式细胞术检测Tara蛋白的磷酸化对HeLa细胞胞质分裂及细胞增殖的影响。结果：Plk1与Tara在体内外均能结合；Tara蛋白在体内外均能够被Plk1磷酸化修饰；过量表达Tara蛋白的磷酸化突变体对HeLa细胞的胞质分裂有明显的抑制作用，细胞增殖明显受阻。结论：Plk1能够与Tara结合，并通过磷酸化修饰Tara蛋白阻碍细胞胞质分裂进程及抑制细胞增殖。
