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K9 基因文献资料
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卡波氏肉瘤病毒 K9基因重组慢病毒表达载体的构建及其编码蛋白功能初探
目的：构建卡波氏肉瘤病毒（Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus，KSHV）K9基因的重组慢病毒载体，并探究 K9基因编码的病毒干扰素调节因子1（viral IFN regulatory factor 1，vIRF1）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法：根据 K9基因的核酸序列设计聚合酶链式反应（PCR）的上下游引物。以实验室已有的真核表达载体 pCI-K9-Flag 为模板，PCR 扩增 K9基因序列。PCR 产物经限制性内切酶双酶切后插入慢病毒载体 pHAGE-CMV-MCS-Izs-Green（简称 pHAGE）中，构建重组慢病毒质粒 pHAGE-K9。将 pHAGE-K9质粒与包膜质粒 pMD2．G、包装质粒 psPAX2共同转染人胚肾上皮细胞（293 T 细胞），包装 K9基因的重组慢病毒。采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。慢病毒感染 HUVECs 后，观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，蛋白质印迹法检测 HUVECs 中 K9编码的 vIRF1蛋白的表达。采用流式分选技术获得稳定表达 vIRF1蛋白的 HUVECs。运用细胞增殖实验检测 vIRF1对 HUVECs 增殖的影响。结果：核酸序列测定结果表明，重组慢病毒质粒 pHAGE-K9构建成功。蛋白质印迹结果显示，K9基因重组慢病毒感染 HUVECs 后其编码蛋白成功表达。细胞增殖实验结果表明，稳定表达 vIRF1的 HUVECs 增殖能力显著强于对照组。结论：KSHV K9基因编码的 vIRF1能够促进 HUVECs 的增殖。
关键词： 卡波氏肉瘤病毒 K9 基因 病毒干扰素调节因子 1 慢病毒 人脐静脉血管内皮细胞 细胞增殖
