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CD137-CD137L信号通过CaM-CaN通路调控小鼠血管平滑肌细胞NFATc1表达
目的:探讨CD137-CD137L信号是否通过钙调蛋白-钙调神经磷酸酶(Calmodlin-Calcineurin,CaM-CaN)通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)的表达.方法:采用改良组织贴块法原代培养小鼠血管平滑肌细胞.实验分两部分,第一部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10 μg/mL)和CD137抑制组(抑制型CD137抗体10 μg/mL预孵30 min后+ 激动型CD137抗体10 μg/mL);第2部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10 μg/mL)、siCaM组(si-CaM+CD137刺激组)和siCaN组(si-CaN+CD137刺激组).分别采用蛋白质印迹和RT-PCR检测平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1的蛋白和mRNA表达水平.结果:(1) 蛋白质印迹和RT-PCR结果显示,与对照组相比,CD137刺激组小鼠平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1表达明显升高(P<0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组CaM、CaN及NFATc1表达显著降低(P<0.05).(2)通过si-RNA技术分别沉默CaM和CaN后,与CD137刺激组相比,siCaM组CaM、CaN及NFATc1表达水平明显降低(P<0.05);siCaN组的CaM无明显改变(P>0.05),而CaN及NFATc1表达明显降低(P<0.05).结论:CD137-CD137L信号可能通过CaM-CaN通路调控NFATc1的表达.
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microRNA-124-2在CD137-CD137L信号通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子C1表达中的作用
目的 探讨microRNA-124-2在CD137-CD137L信号通路调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子C1(NFATc1)表达中的作用.方法 小鼠血管平滑肌细胞采用组织贴块法原代培养,细胞中micmRNA-124-2表达采用RT-PCR法检测;应用脂质体转染技术将microRNA-124-2的模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染至小鼠VSMC内,细胞中NFATc1 mRNA及蛋白表达采用实时荧光定量PCR及Western blot方法检测;应用双荧光素酶报告检测microRNA-124-2对NFATc1-3' UTR的作用.结果 anti-CD137特异性刺激CD137-CD137L轴后,平滑肌细胞microRNA-124-2表达较对照组降低(0.29±0.13比1.00±0.00,P＜0.05),而anti-CD137L特异性阻断CD137-CD137L轴后,细胞中microRNA-124-2表达较对照组增加(3.42±0.17比1.00±0.00,P＜0.05);与阴性对照组相比,升高或下调micmRNA-124-2的表达均可逆转CD137-CD137L轴对NFATc1的作用;双荧光素酶报告系统显示micmRNA-124-2对NFATc1-3' UTR有抑制作用(0.283±0.011比1.294±0.143,P＜0.001).结论 CD137-CD137L受体-配体轴可以通过调控microRNA-124-2进而影响NFATc1的表达.
