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固相萃取及反相层析分离提纯紫杉醇
采用Sep-Pak C18-硅胶、硅胶及氧化铝三种固相萃取和液-液萃取对云南红豆杉浸膏中的紫杉醇进行了初分离,其中以氧化铝固相萃取分离紫杉醇的效果好,可使紫杉醇含量从0.65%提高到10%左右.获取的紫杉醇粗品再经反相层析纯化精制,紫杉醇的含量可进一步提高到了95%以上,紫杉醇的总回收率达96%.建立了一条简捷、高效的紫杉醇提纯路线.
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短尾蝮蛇毒纤溶酶原激活剂的分离纯化及活性测定
目的 从短尾蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶原激活剂(plasminogen activator of Gloydius brevicaudus venom,GBV-PA),对其理化性质及部分生物活性进行研究.方法 应用苯甲脒-琼脂糖凝胶(Benzamidine Sepharose 6B)亲和层析及Lichrospher C18反相层析柱进行分离纯化,应用SDS-PAGE测定分子量、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳测定等电点,以发色底物法测定生物活性.结果 通过亲和层析、反相层析等方法可从短尾蝮蛇毒中分离纯化出纤溶酶原激活剂至电泳纯以上,其相对分子质量约为32.6×103,等电点约为5.2,能特异激活人纤溶酶原为纤溶酶,其比活性为2.87 t-PA IU·mg-1;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性.结论 应用亲和层析和反相层析可从短尾蝮蛇毒获得一种纤溶酶原激活剂;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性.
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长效胰岛素高效反相制备工艺的研究
目的 建立长效胰岛素反相纯化制备方法.方法 通过筛选不同类型反相层析填料、不同成分流动相、不同洗脱梯度以及考查大上样量,确定反相纯化方法:填料:Kromasil的C8(100?-10 μm),流动相A是pH 7.5的Tris-HCl,B是乙腈,检测波长280 nm,线性流速:252 cm·h-1.结果 上样量1.1~1.6%(W/W)在的范围内,纯化收集样品纯度可达99%以上,得率90%以上.结论 该纯化工艺可制备获得符合质量标准的合格样品,该方法具有分离效果好,成本低,易于放大等优点.
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粉防己碱纯化工艺研究
使用AKTAexplorer中压制备色谱仪自动进行凝胶筛选和条件优化,开发出两步层析法纯化粉防己碱的生产工艺,第一步用Sepharose SP HP离子交换介质从粉防己酸性浸提液中直接捕捉粉防己碱,第二步用Source 15RPC中压反相层析介质进行精细纯化,该工艺成功获得纯度98.6%的粉防己碱,回收率为80.5%.
