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Wnt-3a信号途径对毛乳头细胞聚集性生长作用的初步研究
目的 探讨Wnt-3a信号途径对体外培养的毛乳头细胞聚集性生长特性的影响.方法 构建重组腺病毒pAdEasy-1/Wnt-3a,并以该重组腺病毒感染体外培养的毛乳头细胞,观察细胞生长特性的改变;应用激光共聚焦技术和Western印迹检测β-连环素及相关蛋白多功能蛋白聚糖的表达情况.结果 Wnt-3a的过表达可以有效诱导毛乳头细胞聚集性生长.激光共聚焦显微镜检查提示,Wnt-3a过表达的毛乳头细胞β-连环素和多功能蛋白聚糖的荧光强度分别由34.16±9.62和18.81±9.59升高至87.35±17.28和92.18±18.39(t值分别为11.98,17.88,P值均＜0.01);Western印迹也提示,Wnt-3a过表达的毛乳头细胞β-连环素和多功能蛋白聚糖的表达强度南15.27±2.17和19.32±2.46升高至60.09±7.24和58.46±2.78(t值分别为10.10,20.63,P值均＜0.01).结论 Wnt-3a是调节毛乳头细胞聚集性生长的重要分子,主要通过以β-连环素为核心蛋白的经典途径发挥调节作用,多功能蛋白聚糖作为Wnt信号途径的重要相关基因,是该调节的重要环节.
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多功能蛋白聚糖Versican与TNF-α在胆囊癌组织的表达及意义
目的:探讨多功能蛋白聚糖Versican与TNF-α在胆囊癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化方法检测并比较Versican与TNF-α在62例胆囊癌组织(肿瘤组)、30例胆囊结石伴慢性炎症的胆囊组织(炎症组)、20例正常胆囊组织(正常组)中的表达,分析两者与胆囊癌患者临床病理特征及预后的关系.结果:Versican与TNF-α在正常组、炎症组、肿瘤组中阳性表达率均呈依次逐渐增高,差异均有统计学意义(均P＜0.05);Versican与TNF-d在胆囊癌组织中的表达呈正相关(r=0.501,P＜0.05).Versican与TNF-α的表达均与患者TNM分期、淋巴结转移有关,且Versican还与胆囊癌分化程度有关(均P＜0.05).生存分析显示,Versican与TNF-α阳性表达患者生存率均明显低于各自阴性患者(x2=5.240、5.493,均P＜0.05),但两者均阳性患者的生存率与两者单一阳性的患者差异无统计学意义(均P＞0.05).结论:Versican与TNF-α可能在胆囊癌的发生发展过程中起重要作用,且Versican与TNF-α的阳性表达为胆囊癌的不良预后因素.
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Versican基因RNAi慢病毒载体的构建及其对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用
目的 构建Versican基因RNAi慢病毒载体并研究Versican对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用.方法 根据人Versican基因序列,构建4个携带RNAi序列的慢病毒载体,利用293T细胞进行慢病毒包装.实验分为Control组(不做处理)、NC组(用空慢病毒载体包装的病毒转染细胞)和KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒感染组.应用KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒及NC慢病毒感染H1299细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Real-time PCR检测Versican的表达,筛选出感染效率和特异性高的慢病毒载体进行下一步研究.用慢病毒感染毛乳头细胞后,用Real-time PCR检测Versican基因的表达,并用Western blot检测Versican、ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达,应用光镜观察毛乳头的生长情况.结果 成功构建4种慢病毒载体,其中KD2慢病毒感染H1299细胞较其他慢病毒、Control和NC组显著下调Versican mRNA的表达(P＜0.01).应用KD2慢病毒感染毛乳头细胞后,较Control和NC组明显下调毛乳头细胞Versican mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达较Control组明显下调(P＜0.01),毛乳头细胞聚集性生长的特性消失.结论 成功构建了Versican基因RNAi慢病毒载体.Versican基因通过c-JUN-ADAMTS-4通路调控毛乳头细胞的聚集性生长.
