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miR-494在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测5种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7和乳腺上皮细胞系HBL-100中miR-494的表达水平;收集54对乳腺癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR法检测其miR-494的表达水平,并分析其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系.结果 qRT-PCR检测结果显示,与正常乳腺上皮细胞HBL-100相比,MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7乳腺癌细胞系中miR-494的表达水平均明显降低(t分别为212.9、37.73、27.53、10.61、19.46,P均＜0.05).此外,miR-494在乳腺癌组织中的表达水平亦明显低于癌旁组织(t=5.80,P＜0.01),且与临床分期(x2=17.41,P＜0.05)、组织病理分级(x2=5.33,P＜0.05)、C-erbB-2表达情况(x2=9.83,P＜0.05)、Ki-67阳性细胞百分比(x2=6.13,P＜0.05)有关.结论 miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中低表达,且与乳腺癌临床分期、转移和预后关系密切,可成为乳腺癌辅助诊断和预后判断的分子标志.
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微小RNA-494通过调节生存素表达对骨肉瘤凋亡和侵袭的调控作用
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-494通过调节生存素(Survivin)对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡及侵袭的影响.方法 miR-494体外模拟物(mimic)转染,构建miR-494上调表达模型,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法验证转染效果;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖率变化;流式细胞技术检测细胞凋亡率变化;细胞体外侵袭试验检测细胞侵袭能力变化;Real-time PCR法和Western blot实验分别检测Survivin mRNA和蛋白表达水平.结果 miR-494 mimic转染后,MG-63细胞中miR-494表达水平(4.38±0.53)较对照组(1.02±0.02)明显升高(t=6.312,P=0.003),miR-494 mimic转染后24h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组,流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率[(8.76±0.82)％]较对照组[(5.43±0.63)％]明显提高(t=3.199,P =0.032),体外侵袭实验证实mimic组每视野下平均细胞数[(60.40±11.28)个]明显少于NC组[(109.51±7.46)个,t=3.628,P=0.022],Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-494mimic转染后,Survivin在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制.结论 miR-494表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,这些作用与下调Survivin表达有关.
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微小RNA-494通过抑制第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因的表达促进乳腺癌MCF-7细胞的增殖和转移
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-494对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移的调控作用以及机制.方法 在乳腺癌细胞株MCF-7转染miR-494模拟物及抑制剂、阴性对照,然后采用噻唑蓝(MTT)方法检测miR494对MCF-7细胞活力的影响,并通过Transwell转移实验检测miR-494对MCF-7转移能力的影响.通过双荧光素酶实验检测miR-494的靶基因,并且用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot进行验证.结果 转染miR-494 mimics后,细胞活力明显提高,24 h细胞活力比值为1.28,48 h后为1.80,(P＜0.05),转染miR-494 inhibitor后,细胞活力显著下调,24h细胞活力比值为0.80,48 h后为0.68(P ＜0.05).对照组细胞均数为67个/视野,转染miR-494mimics后的MCF-7细胞的均数为:122个/视野(P＜0.05),转染miR-494 inhibitor后的MCF-7细胞的均数为:47个/视野(P＜0.01).野生型载体模拟物组相对荧光素酶活性:0.69(P＜0.01),抑制剂组:1.90(P＜0.01);突变型载体模拟物组相对荧光素酶活性:1.09,抑制剂组:1.19.miR-494过表达后PTEN的mRNA和蛋白水平确实出现明显下降,相反地,miR-494的抑制却导致PTEN蛋白水平和mRNA水平的上调.结论 高表达miR-494可显著促进乳腺癌细胞株MCF-7的增殖与转移能力,抑制miR-494可显著降低MCF-7的增殖与转移能力,并且证实miR-494是通过靶向第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的3'端非编码区域(3'-UTR)来调节乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和转移能力.
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微小RNA-494过表达与RNA干扰抑制Survivin基因对前列腺癌移植瘤生长的比较
目的 比较过表达微小RNA (microRNA)-494与采用RNA干扰抑制前列腺癌PC-3细胞中Survivin基因的表达,对前列腺癌移植瘤生长的影响.方法 将过表达microRNA-494的腺病毒载体Ad-494及负载Survivin短发卡RNA (shRNA)腺病毒载体Ad-sur分别或联合感染PC-3细胞后,将相应PC-3细胞接种于裸鼠右前肢皮下,建立前列腺癌移植瘤模型.并以磷酸盐缓冲液(PBS)组及空载体组(Ad-GFP)作为对照.动态测量肿瘤体积.55 d后处死各组裸鼠,瘤体称重计算抑瘤率.Western blot检测肿瘤组织中Survivin表达变化.免疫组织化学测定Survivin、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达变化.结果 Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+ Ad-494组裸鼠前列腺癌移植瘤的生长明显被抑制.第35天时即表现差异.其中Ad-sur+ Ad-494组瘤体积小,为(40.69±0.69) mm3,Ad-sur、Ad-494组瘤体体积分别为(102.11±5.32) mm3、(99.03±3.50) mm3,3组肿瘤体积均明显小于PBS组(572.72±10.46) mm3、Ad-GFP组(544.85 ±10.28) mm3(P＜0.05).但Ad-sur组与Ad-494组间瘤体大小差异无统计学意义(P＞0.05).55 d后,Ad-sur、Ad-494、Ad-sur+ Ad-494组对移植瘤抑制率分别64.62％、65.98％、86.67％,Ad-sur+ Ad-494组具有抑瘤增效的相加作用(Q=0.99).同对照组比较,实验各组的Survivin基因均表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).其中,Ad-494组与Ad-sur组间差异无统计学意义(P＞0.05),Ad-sur+ Ad-494组较Ad-494、Ad-sur组更为显著；实验各组中的bax、Caspase-3表达上调,bcl-2表达下调,且Ad-sur+ Ad-494组效果优于Ad-sur、Ad-494组.结论 过表达microRNA-494与RNA干扰方法均可抑制前列腺癌裸鼠移植瘤Survivin基因表达,从而抑制移植瘤的生长,且两者联合效果更加显著.
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微小RNA-494通过抑制Survivin诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡
目的 观察微小RNA( miRNA) -494对人前列癌PC-3细胞中Survivin基因的表达抑制及对PC-3细胞增殖与凋亡的影响.方法 TargetScan 5.2预测miRNA-494与Survivin mRNA配对评分为mirSVR score:-0.4916、PhastCons score:0.4876；定量聚合酶链反应(qPCR)分析PC-3相对于正常前列腺上皮细胞株RWPE-1中miRNA-494的上下调情况；构建过表达miRNA-494的腺病毒载体,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪分析分别检测感染前后Survivin基因及蛋白的表达差异、细胞增殖及生长周期和凋亡变化.结果 miRNA-494在PC-3中的表达为RWPE-1中的(0.547±0.032)倍；Ad-pre-miRNA-494构建成功；实验组细胞增殖抑制呈现时间依赖性；和对照组比较,72 h后实验组Survivin蛋白表达为(21.69±4.62)％,与空载体组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),流式细胞仪检测结果显示实验组PC-3细胞G2/M期阻滞率及细胞凋亡率显著增加.结论 miRNA-494通过抑制前列腺癌PC-3细胞中Survivin基因的表达而诱导前列腺癌PC-3凋亡.
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MicroR NA-494参与多种疾病发生发展的分子机制研究进展
微小 RNA （ microRNA， miRNA， miR ）是一种由20～22个核苷酸组成的内源性非编码小分子单链RNA，它可以在后转录水平通过以完全互补或不完全互补的形式与mRNA的3’ UTR区结合调控细胞增殖、分化及凋亡等多个生理病理过程［1］。其中， miR-494是一种来源于染色体14q32．31的 mi-RNA［2］。近年来的研究发现miR-494参与人体多个生理及疾病的发生发展过程，在肿瘤、缺血缺氧疾病中其表达水平发生上调或下调。本文就miR-494在多种疾病中的表达变化、作用及机制研究进行综述。
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过表达MiR-494抑制脑胶质瘤细胞U87的增殖
目的 观察微小RNA-494(miR-494)对脑胶质瘤细胞U87增殖能力的影响.方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测5例瘤旁组织和14例胶质瘤样本中miR-494的表达水平,并且检测其在6种胶质瘤细胞系中的表达;将100 nmol/L miR-494 mimics瞬时转染至脑胶质瘤U87细胞,qRT-PCR检测miR-494表达情况;采用四唑盐比色法(MTT)检测U87细胞增殖情况;流式细胞术(FCM)检测对U87细胞周期的影响.结果 与瘤旁脑组织相比,miR-494在胶质瘤中呈现低表达;U87细胞转染48 h后,miR-494 mimics组miR-494表达为对照组的357倍(P＜0.05);与对照组相比,miR-494 mimics转染后抑制了U87细胞的增殖能力(P＜0.05);S期细胞显著减少,而G1期细胞则明显增多.结论 miR-494在胶质瘤中低表达,过表达miR-494 mimics有效抑制了U87细胞的增殖,调节细胞周期S期降低G1期增多,提示miR-494有望成为胶质瘤治疗的分子靶点.
