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微小RNA-143对人胰腺癌PANC-1细胞迁移的抑制作用及其机制的探讨
目的:探讨微小RNA (microRNA,miR)-143对人胰腺癌PANC-1细胞生物学特性的影响.方法:人工合成miR-143的模拟物,并通过LipofectAMINETM2000转染入PANC-1细胞.采用实时荧光定量PCR法检测miR-143的表达水平.采用MTT法和FCM法检测对细胞增殖及凋亡的影响,采用Transwell小室和划痕实验检测对PANC-1细胞迁移能力的影响.构建野生型及突变型转化生长因子β活化激酶1[transforming growth factor (TGF)-β activated kinase 1,TAK1]的3’端非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)双荧光素酶报告载体,检测海肾荧光素酶的相对活性以验证miR-143对TAK1 mRNA的作用靶点.结果:转染miR-143模拟物后,PANC-1细胞中miR-143表达上调,但其细胞增殖及凋亡与转染前的差异无统计学意义(P＞0.05).转染miR-143组通过Transwell小室的细胞数明显低于各对照组,划痕实验检测结果显示细胞迁移能力受到抑制(P＜0.05).与各对照组相比,共转染野生型TAK1的3’-UTR和miR-143可使海肾荧光素酶相对活性显著降低.结论:miR-143对人胰腺癌PANC-1细胞的迁移能力有抑制作用,TAK1可能是其靶基因之一.
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TAK1抑制TGF-β1诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的实验研究
目的 探讨TAK1对TGF-β1诱导小鼠巨噬细胞凋亡的影响.方法 电穿孔法将TAK1等目的基因质粒瞬时转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,pEGFP-CⅡ观察转染效率,采用Real time-PCR及Western blot检测RAW264.7细胞转染后TAK1基因和蛋白的表达水平,流式细胞术检测过表达TAK1后对RAW264.7细胞凋亡的影响.结果 TAK1转染组、TAK1 +TAB1共转染组细胞凋亡率明显低于空质粒对照组.结论 巨噬细胞中过表达TAK1能抑制TGF-β1刺激所诱导的凋亡,且共转染TAB1+TAK1组抑制作用明显.
关键词： 转化生长因子β活化激酶1 凋亡 巨噬细胞 TGF-β1
