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应用酵母双杂交技术筛选与癌性锚蛋白重复序列相互作用的蛋白
目的:筛选与癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)相互作用的蛋白.方法:构建诱饵(Bait)质粒pGB-Psmd10-1,采用β-半乳糖苷酶滤膜分析检测其自身转录活性,以Bait质粒筛选人Hela细胞MATCHMAKER cDNA文库,共转染重复验证阳性克隆,并测序鉴定.结果:成功构建Bait质粒,经验证对报告基因LacZ无自激活作用.以Bait质粒筛选人Hela细胞cDNA文库,获得83个克隆,其中5个克隆经重复验证确定为阳性克隆,测序结果显示其cDNA为Psmc4的3段不同剪接体(NM_006503.2,NM_153001.1).结论:在人Hela细胞中,Psmc4为与Gankyrin相互作用的蛋白.
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癌性锚蛋白重复序列在胃癌细胞凋亡中的作用
目的 探讨癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)在人胃癌细胞的表达,以及在尼美舒利诱导细胞凋亡过程中的改变.方法 培养不同分化程度的人胃癌细胞系[MKN28(高分化)、AGS(低分化)、MKN45(低分化)和SGC7901(中分化)],以尼美舒利处理细胞,应用四甲基偶氮唑盐试验和流式细胞术检测细胞活力及细胞凋亡,实时PCR和Western印迹法检测Gankyrin基因和蛋白表达.结果 在4种不同分化程度的人胃癌细胞系中,均存在不同水平的Gankyrin基因和蛋白表达.尼美舒利以时间-剂量依赖方式抑制AGS、FYGC7901细胞增殖.与对照组相比,尼美舒利400 μmol/L处理48 h可诱导AGS、SGC7901细胞显著凋亡(细胞凋亡率分别为0.57%±0.19%比23.30%±2.50%和0.88%±0.17%比16.80%±1.55%,P均<0.01).在AGS细胞凋亡过程中,Gankyrin基因和蛋白表达水平下降,以尼美舒利作用后24 h(0.0035±0.0014)和36 h(0.0980±0.0160)改变为显著(对照组为0.4690±0.1190,P值均<0.01).结论 在人胃癌细胞中存在Gankyrin基因和蛋白表达.Gankyrin可能参与尼美舒利诱导的AGS胃癌细胞凋亡.
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介导抑癌蛋白泛素化的新分子
抑癌蛋白泛素化机制在肿瘤发生发展过程中扮演重要角色.其中,NEDD4-1介导的PTEN泛素化与Cowden综合征密切相关,Livin介导的Smac/DIABLO泛素化,以及癌性锚蛋白重复序列、转录因子E4F1等介导的P53泛素化均在肿瘤发生过程中扮演重要角色.近期研究表明,这些介导抑癌蛋白泛素化的新分子有望成为肿瘤治疗的靶点.
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Gankyrin在结直肠癌和腺瘤中的表达及其临床意义
目的:探讨癌性锚蛋白重复序列(Gann ankyrin repeats,Gankyrin)在结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)和腺瘤组织中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学检测Gankyrin在94例CRC和87例腺瘤组织中的表达,同时分析Gankyrin表达与CRC临床病理学特征的相关性.结果:Gankyrin在正常肠黏膜、腺瘤和CRC中的表达率分别为11.7％(11/94),47.1％(41/87),70.2％(66/94,P＜0.001).Gankyrin在CRC中的表达与组织学分级、临床分期和转移相关(P＜0.05),和患者性别、年龄以及肿瘤大小没有相关性(P＞0.05).结论:Gankyrin不仅参与CRC的早期发生,也与CRC的恶性进展有关,有望成为CRC诊断和防治的靶标.
