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维生素D3参与对脓毒症大鼠肺树突状细胞活性的调节机制
目的 从调节肺树突状细胞(DCs)活性及对抗炎、促炎因子的影响等角度探讨维生素D3(Vit D3)在治疗脓毒症中的作用机制.方法 ①将雌性(SD)幼年大鼠24只,按随机数字表法均分为正常对照组、脓毒症组和Vit D3干预组;②脓毒症组和Vit D3干预组经腹腔注射脂多糖(LPS)制备脓毒症模型;③采用流式细胞仪检测大鼠肺DCs表面分子CD83和CD86的表达水平;④采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠肺组织中促炎因子(IL-12)、抗炎因子(IL-10)水平及大鼠血清25 (OH) D3水平.结果 肺DCs表面分子CD86和CD83表达率脓毒症组[(6.81±0.44)％、(5.52±0.67)％]和Vit D3干预组[(4.58±0.47)％、(3.19±0.50)％]较正常对照组[(0.86±0.13)％、(0.54±0.16)％]明显增高(t=36.115、18.128,18.735、18.908,P＜0.05),但Vit D3干预组肺DCs表面分子CD86和CD83的表达率较脓毒症组降低(t=13.326、7.433,P＜0.05).Vit D3干预组的肺组织促炎因子IL-12[(114.71 ±45.61) ng/L]较脓毒症组[(343.86±97.87)ng/L]降低,而抗炎因子IL-10水平Vit D3干预组[(194.18±24.53) ng/L]较脓毒症组[(150.59 ±32.48)ng/L]增高(t=8.598、2.933,P＜0.05);Vit D3干预组血清25 (OH) D3水平[(41.76±7.97) mg/L]较脓毒症组[(21.58 ±8.04) mg/L]增高(t=6.941,P＜0.05),但两组均明显低于正常对照组[(60.24±5.67)mg/L,t=8.388,10.050,P＜0.05].结论 Vit D3可抑制脓毒症大鼠肺DCs的活化,有助于减轻脓毒症早期过度的免疫反应和炎症反应.
关键词： 维生素D3(Vit D3) 脓毒症 树突状细胞(DCs) -
树突状细胞在喉癌及癌前病变中的表达及意义
目的树突状细胞(DCs)在喉癌及癌前病变中的表达及意义.方法用免疫组化法检测39例喉癌及癌前病变标本中DCs分布特点、DCs表面HLA-DR的表达,以及肿瘤浸润性T淋巴细胞(CD45RA、CD45RO表达)免疫状态.结果喉重度上皮不典型增生与喉鳞状细胞癌的DCs数量明显增多、呈簇状分布.前者T淋巴细胞CD45RA抗原低表达而CD45RO抗原高表达;喉癌组织中结果恰相反.结论喉重度上皮不典型增生与喉鳞状细胞癌的DCs均增加,但喉癌DCs表面HLA-DR表达水平下降,与DCs免疫功能低下相关,一定程度上影响T细胞的激活.
关键词： 树突状细胞(DCs) T淋巴细胞 喉癌及癌前病变组织 肿瘤免疫 -
肝癌相关抗原Kinectin蛋白致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株杀伤作用的检测
目的 探讨肝癌相关抗原Kinectin基因重组蛋白Kinectin-MBP(MBP,麦芽糖结合蛋白)致敏树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株的杀伤作用.方法 体外基因工程的方法表达、纯化Kinectin-MBP.从正常人外周血中分离单个核细胞(PBMC),重组人粒细胞-巨噬细胞集落因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DCs,并通过形态学、流式细胞术鉴定DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后,ELISA检测细胞上清液中IL-12和IFN-γ的含量；将致敏DCs与自体T淋巴细胞混合培养后,MTT法检测T细胞增殖的能力；同时诱导T细胞增殖转化为CTL,以此CTL为效应细胞,Kinectin表达阳性的肝癌细胞株bel-7404为靶细胞,LDH 4 h释放法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.结果 体外重组蛋白技术成功表达、纯化出Kinectin-MBP.PBMC经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导,可成功培养出DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量明显增高,且刺激自体T细胞增殖的能力也显著增强；同时Kinectin-MBP致敏的DCs能明显诱导CTL的增殖,此CTL对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株有较明显的杀伤作用,其杀伤率在效靶比为25∶1时达高峰[为(65.00±1.47 )％],显著高于其他对照组(均P ＜0.001).结论 体外诱导扩增的DCs经肝癌相关抗原Kinectin-MBP致敏后具有较强的刺激自体T细胞增殖的能力,且在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株具有较强的杀伤效应.该实验为将Kinectin蛋白运用于以DCs为基础的肝癌临床免疫治疗奠定了基础.
关键词： Kinectin-MBP 树突状细胞(DCs) 肝细胞癌 CTL -
树突状细胞与HIV-1免疫治疗
抗原提呈细胞(APC),尤其是树突状细胞(DCs)的抗原靶向及活化作用,在疫苗研究中是非常重要的.在HIV-1感染中,DCs具有诱导和维持抗原特异性T细胞免疫反应功能.目前临床试验表明DC免疫治疗在HIV-1感染患者身上是安全和有效的.本文主要对DCs的分化、迁移、成熟及HIV-1的DCs免疫治疗效应、抗原类型、临床试验等进行阐述.
关键词： HIV-1 树突状细胞(DCs) 免疫治疗 -
人癌胚抗原重组痘苗病毒负荷树突状细胞体外诱导特异性T细胞免疫的研究
目的:研究人癌胚抗原重组痘苗病毒(CEA-rV)负荷脐血来源树突状细胞(DC)后能否在体外诱导人癌胚抗原(CEA)特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫.方法:将CEA-rV负荷脐血单核细胞来源的DC后用于激发同源的T细胞,检测其对T细胞的增殖作用以及对CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性,并与未经CEA-rV负荷的DC激发的T细胞进行比较.结果:经CEA-rV负荷的DC激活的T细胞时CEA分泌性肿瘤细胞具特异性杀伤作用.结论:CEA-rV负荷的DC可以诱导CEA特异性T细胞活性.
关键词： 痘苗病毒 癌胚抗原 树突状细胞(DCs) T淋巴细胞 -
转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外研究
目的 探讨人肺腺癌细胞株A549总RNA转染的人树突状细胞(DCs)在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力.方法 利用密度梯度离心法从血细胞分离机新鲜采集的外周富集血中分离出单个核细胞(PBMCs),贴壁获得单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)进一步诱导为树突状细胞(DCs),同时利用提取的A549细胞总RNA转染DCs来制备疫苗,并与T细胞混合培养诱导扩增细胞毒性T淋巴细胞(CTLa);实验分为转染A549细胞总RNA的DC组、未转染DE组和转染空脂质体DC组,分别以流式细胞术(FCM)鉴定DCs表型、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平、~3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异.结果 1)转染总RNA组DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达较未转染组DCs和转染空脂质体组DCs均有升高,CD40在3组的表达率分别为(69.01±7.67)%、(19.28±3.51)%和(39.62±2.72)%;CD80在3组的表达率分别为:(74.39±6.46)%、(15.48±3.03)%和(25.70±2.92)%;CD83在3组的表达率分别为:(81.79±4.61)%、(13.29±2.34)%和(31.42±1.97)%;HLA-DR在3组的表达率分别为:(76.53±5.13)%、(49.23±4.05)%和(29.94±3.53)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)转染总RNA组DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平较未转染组及转染空脂质体组明显升高(P<0.05),3组IL-12分别为(543.24±68.33)、(77.11±27.65)和(167.78±31.84)pg/ml;3组IFN-γ分别为:(122.95±32.84)、(41.06±10.97)和(56.08±15.96)pg/ml;3)~3H-TdR掺入试验所得的cpm,3组分别为(7437±720)、(3 807±476)和(4 543±719),阳性对照组为:16 739±91,差异有统计学意义(P<0.05);4)LDH释放法可见转染A549总RNA的DC组的特异性杀瘤活性(58.54±8.27)%,明显高于未转染组(36.03±4.03)%和转染空脂质体组(33.47±8.21)%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 人肺腺癌细胞A549总RNA转染的DC疫苗体外诱导的特异性抗肿瘤免疫能力显著增强,有望为肺腺癌的治疗提供新的手段.
关键词： 人肺腺癌细胞(A549) 树突状细胞(DCs) RNA 转染 体外诱导 抗肿瘤疫苗 肿瘤免疫
