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流式细胞术BrdU/DNA双染法测定云芝糖肽诱导的Molt-4细胞周期阻滞
目的:探究云芝糖肽(PSP)对人急性淋巴母细胞白血病Molt-4细胞周期的影响.方法:采用流式细胞术BrdU/DNA双染法获得各时相细胞分布状况和细胞周期的动力学参数.结果:0.1 mg/mlPSP处理12h后,G2/M期细胞百分比由对照组的11.09％减少至3.69％.DNA合成时间电12.10 h延长至108.40 h.24h处理组中,S期细胞百分比由对照组的43.29％增加至67.26％,而G0/G1期和G2/M期细胞百分比均减少,G0/GI期细胞百分比由对照组的37.47％减少至27.43％,G2/M期细胞百分比由对照组的19.24％降低至5.31％.DNA合成时间更是由11.95 h延长至114.52 h.结论:PSP对人急性淋巴母细胞白血病Molt-4细胞周期的阻滞作用在于S期,该作用与DNA合成抑制有关.
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云芝糖肽在ROS、p38信号通路中对巨噬细胞Raw264.7的免疫调节作用
探究云芝糖肽(PSP)对静息和脂多糖(LPS)过度刺激两种不同状态的巨噬细胞Raw264.7产生活性氧簇(ROS)及p38、p-P38的影响及其相关机制.方法:采用流式细胞术方法检测ROS的表达；Western blot方法检测MAPK信号通路中p38磷酸化及非磷酸化的相对表达量.结果:100g/m1 PSP下调1g/ml LPS单独作用于巨噬细胞时ROS及p-p38的表达量；100g/mlPSP上调正常巨噬细胞p-P38的表达量；p38表达量基本不变.结论:PSP通过ROS,p38两条通路参与巨噬细胞的免疫调节作用.
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云芝糖肽的HPCE分析方法的建立
目的:为建立云芝糖肽(PSP)高效毛细管电泳(HPCE)的分析方法从而建立PSP的特征指纹谱而进行的电泳条件优化.方法:采用高效毛细管电泳法(CZE),通过对电解质种类、浓度、电解质溶液的pH、电压、温度以及毛细管柱长和柱径等参数的优化,对PSP(糖蛋白)和作为标准品的牛血清白蛋白(BSA)进行分离分析.结果:10mmol·L-1的硼酸缓冲液,pH=9.18,毛细管直径50μm,柱长57cm,有效柱长48.5cm的泡状柱,运行电压30KV,温度25°C,样品用50mbar进样8S,分析时间7min,DAD全波长扫描检测条件下可以成功地进行PSP和BSA的分离分析.结论:本法简便,快速,稳定,可以进一步建立云芝糖肽的高效毛细管电泳的特征指纹谱.
关键词： 云芝糖肽(PSP) 高效毛细管电泳(CZE) DAD检测 特征指纹谱 -
云芝糖肽对HBV感染者外周血单个核细胞的调节作用
目的:探讨云芝糖肽(PSP)对HBV感染者体外免疫调节作用及机制,为临床治疗慢性乙型病毒性肝炎提供理论依据.方法:PSP与HBV感染者和健康人外周血单个核细胞(PBMC)体外共培养,用ELISA检测培养液上清液中IFN-γ及IL-12的水平.结果:HBV感染者和健康人的PBMC在PSP作用下培养72h,上清液中IFN-γ和IL-12水平明显高于空白组,经统计学处理差异显著,呈现明显的促进作用.健康人PBMC培养上清液中分泌的IFN-γ和IL-12的水平普遍高于HBV感染者.结论:PSP作为一种免疫调节剂,可诱发HBV感染者的免疫效应,上调Th1型细胞因子IFN-γ和IL-12的表达,说明PSP具有免疫促进作用,是一种有效的免疫增强剂,可能在治疗HBV慢性感染方面具有一定的作用.
