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过氧化物酶蛋白1真核表达载体构建及在Hela细胞的表达与定位
目的:构建过氧化物酶蛋白1 (PRDX1)的真核表达载体,观察其在He1a细胞内表达及定位.方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增得到小鼠PRDX 1编码序列,酶切后克隆至pcDNA3-myc载体.重组质粒通过PCR、酶切、测序证明构建正确后经脂质体转染He1a细胞,然后利用Western blot和荧光显微镜技术观察该融合蛋白在细胞内表达及定位.结果:经鉴定证明重组质粒构建正确；Western blot实验显示,该质粒能够在He1a细胞中特异表达；免疫荧光试验显示,蛋白产物分布在胞浆和胞核,证明该蛋白在细胞内高表达.结论:成功构建带有myc标签的PRDX 1真核表达载体,该质粒能够在哺乳细胞中特异表达并且外源性PRDX1蛋白分布在Hela细胞胞浆胞核内,为深入研究PRDX1蛋白在细胞内相关生物学研究奠定了基础.
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过氧化物酶1在乳腺癌中的研究进展
过氧化物酶1(PRDX1)是新近发现的非硒依赖过氧化物酶家族的重要成员,广泛存在于生物体内,参与调控活性氧相关的多种信号通路,从而调控机体的多种生理功能,如细胞生长、细胞凋亡、免疫应答及细胞内环境稳定等.越来越多的证据表明PRDX1与多种恶性肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关.近年研究发现PRDX1在乳腺癌中具有抑癌和促癌双重作用并与雌激素受体的表达和功能有关,对乳腺癌的诊治有潜在价值.本文对PRDX1的结构功能、作用机制及在乳腺癌中的研究进展作一综述.
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杜氏盐藻过氧化物酶1酵母双杂交诱饵质粒的构建
目的：构建杜氏盐藻过氧化物酶1（ DsPrdx1）的酵母双杂交诱饵质粒并检测其对酵母细胞有无自激活及毒害作用。方法：PCR扩增DsPrdx1的开放阅读框，将扩增出的基因片段插入酵母表达质粒pGBKT7中构建诱饵质粒。经酶切鉴定正确后，用PEG/LiAc法将构建的诱饵质粒分别转化到酵母菌株Y187和AH109中，检测诱饵蛋白对酵母菌有无自激活和毒性作用。结果与结论：构建的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-Prdx1对Y187和AH109既无自激活又无毒害作用，可用于酵母双杂交系统。
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过氧化物酶1对人肝癌细胞HepG2细胞皮下移植瘤生长的影响
目的 探讨过氧化物酶1(Prx1)在肝癌形成和恶性进展中的作用.方法 蛋白质印迹法(Western blot)检测远癌肝组织和近癌肝组织中Prx1、pAkt及Akt表达差异.肝细胞饥饿培养24 h后,10 ng/ml表皮生长因子(EGF)处理10 min,提取总蛋白,Western blot检测Prx1、pAkt、不同位点磷酸化表皮生长因子受体(EGFR)和总EGFR.Western blot检测检测未处理组、转染无义shRNA组及转染Prx1 shRNA组HepG2细胞中Prx1蛋白的表达.DCFH-DA法检测3种HepG2细胞中活性氧簇总量.转染无义shRNA组及转染Prx1shRNA组HepG2细胞皮下注射至SCID小鼠,注射后每周测量1次皮下肿瘤体积.Western blot检测两组小鼠皮下肿瘤组织中Prx1和pAkt的表达情况.结果 与正常肝细胞比较,Prx1在肝转化细胞中表达升高.Prx1增强了EGF介导的EGFR和Akt激活.Prx1表达沉默抑制了HepG2体内成瘤能力.减少HepG2皮下移植瘤的肝转移.Prx1表达沉默还抑制了Akt体内激活.结论 Prx1具有调控人肝细胞中EGFR介导信号通路的潜在作用.Prx 1能够通过EGFR-Akt信号通路介导细胞正常至异常转化、肿瘤形成及转移.
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过氧化物酶1,6和GFAP在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及临床意义
目的 确定星形胶质细胞瘤中过氧化物酶1(Prxl)、过氧化物酶6(Prx6)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,探讨其表达水平与星形胶质细胞瘤恶性程度的关系.方法 采用Western blot、RT-PCR和免疫组化检测52例星形胶质细胞瘤(Ⅱ级23例、Ⅲ级15例、Ⅳ级14例)和12例正常脑组织标本中Prx1、Prx6和GFAP的表达情况.结果 Prx1、Prx6在正常脑组织、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平逐渐升高,具有统计学意义(P＜0.05)；GFAP在Ⅲ、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平低于Ⅱ级星形胶质细胞瘤和正常脑组织(P＜0.05).结论 Prx1、Prx6和GFAP可能是临床评价星形胶质细胞瘤恶性程度和侵袭性的潜在生物标志物,可作为星形胶质细胞瘤生物治疗的潜在靶分子.
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慢性心理应激对人卵巢癌移植瘤中 Prdx1和Prdx3蛋白的影响
目的：探讨慢性心理应激对肿瘤发生发展的影响及其可能机制。方法将裸鼠随机分成应激组及对照组，每组10只；两组均皮下注射SKOV3细胞建立荷人卵巢癌皮下移植瘤模型。应激组裸鼠采用束缚应激法进行应激，构建荷人卵巢癌裸鼠慢性心理应激模型；而对照组整个实验中不接受应激。观察两组移植瘤的生长状况；采用蛋白组学方法筛选、鉴定、验证应激组与对照组移植瘤之间的差异蛋白；分析典型差异表达蛋白与肿瘤生长的可能联系。结果应激组裸鼠的移植瘤生长速度比对照组快，终瘤重（1.717±0.571） g明显高于对照组的（1.083±0.286）g（P＜0.05）；两组移植瘤中存在数百种差异表达蛋白，有20个蛋白质斑点变化超过2倍，其中Prdx1和Prdx3蛋白在应激组中表达上调极其明显（ P＜0.05）。结论慢性心理应激可能是通过Prdx1激活NF－κB通路促进卵巢癌的进展，Prdx1和Prdx3可能成为治疗卵巢癌的靶点。
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过氧化物酶1在肿瘤中的研究进展
过氧化物酶（peroxiredox ，PRX）是一类具有多种生物学功能的抗氧化物酶，原核生物和真核生物中广泛存在该过氧化物。在正常生理条件下，通过催化 H2 O2和脂质氢过氧化物的还原反应，避免细胞受到进一步氧化损伤。哺乳动物的6种PRX蛋白家族可分为3个亚类：PRX1～4属于典型的2‐Cys Prxs ，PRX 5、Prx6分别属于非典型的2‐Cys Prx和1‐Cys Prx。虽然他们都能够通过相似的细胞信号途径来平衡细胞内H2 O2水平，但各自在作用靶点及抗氧化保护机制中存在差别。PRX1是该家族中细胞分布为广泛的成员。在细胞内不仅能起到抗氧化和调节 H2 O2介导的信号转导作用，同时还能发挥分子伴侣的功能，参与体内多种生理病理过程。近，越来越多的研究发现该蛋白在肿瘤的发生、发展以及治疗中起着重要作用。现就PRX1在肿瘤中的研究进展作一综述。
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过氧化物酶1在卵巢上皮性浆液性肿瘤中的表达及其临床意义
目的:检测过氧化物酶1(peroxiredoxin 1,PRDX1)在卵巢上皮性浆液性癌中的表达,探讨并预测PRDX1参与肿瘤发生发展的机制及其临床意义.方法:采用免疫组化SP法检测55例卵巢上皮性浆液性乳头状癌、11例卵巢上皮性交界性肿瘤、21例卵巢上皮性良性肿瘤以及15例正常卵巢组织中PRDX1的表达情况,利用单因素和多因素Cox回归模型分析其与卵巢上皮性浆液性乳头状癌临床病理参数及预后的关系.从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集374个卵巢癌样本,并对PRDX1进行基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA).结果:PRDX1以胞浆着色为主.PRDX1在卵巢上皮性浆液性乳头状癌中的阳性率(96.36％)明显高于卵巢上皮性交界性肿瘤(72.72％)、卵巢上皮性良性肿瘤(57.14％)及正常卵巢组织(20％)(P均＜0.05).在卵巢上皮性浆液性乳头状癌中,PRDX1表达随FIGO分期增加而增加(P＜0.05),PRDX1为影响卵巢上皮性浆液性癌预后的独立危险因素(P＜0.05).基因富集分析发现PRDX1高表达样本富集到氧化磷酸化基因集,PRDX1低表达样本富集到Wnt信号通路、ErbB信号通路、Notch信号通路、癌症信号通路、黏附桥接等基因集.结论:PRDX1参与调控肿瘤Wnt、ErbB、细胞黏附、氧化应激等信号通路,其表达与卵巢癌的发生、发展及预后相关,可作为卵巢癌预后的标记物.
关键词： 卵巢上皮性浆液性肿瘤 过氧化物酶1 免疫组织化学 癌症基因组图谱 预后
