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T-cadherin基因在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞DU145增殖的影响
目的 探讨T-cadherin基因在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞DU145增殖的影响.方法 采用RT-PCR法检测40份前列腺癌及相应癌旁组织中T-cadherin基因mRNA的表达.分别用10 ml滴度为1.6×1012 pdf/ml的GFP-T-cadherin腺病毒(Ad-GFP-T-cadherin)和GFP腺病毒(Ad-GFP)感染前列腺癌DU145细胞后,MTT法检测T-cadherin对前列腺癌DU145细胞增殖的影响,Western blot法检测T-cadherin对P21和cyclin D1蛋白表达水平的影响,同时设空白对照组(未感染病毒).结果 T-cadherin在38/40(95％)的前列腺癌中表达下调(P＜0.01),其表达与前列腺癌的分期、格里森评分及分化有关.Ad-GFP-T-cadherin组DU 145细胞中P21蛋白表达水平明显高于Ad-GFP组及空白对照组(P＜0.01),而cyclin D1蛋白表达水平及增殖活性明显低于Ad-GFP组及空白对照组(P＜0.01);空白对照组DU145细胞的增殖活性及细胞中P21、cyclin D1蛋白表达水平与Ad-GFP组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 T-cadherin的表达与前列腺癌的发生密切相关,且可通过上调P21和下调cyclin D1蛋白的表达抑制前列腺癌DU145细胞的增殖.
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胡椒碱与棉酚联用对前列腺癌DU145细胞生长抑制的协同作用
目的 研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制.方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达.结果 胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉酚联用时,表现出协同作用.棉酚对细胞的半数抑制浓度IC50由单用时的21.00 μmol·L-1下降到联合用药时的8.07 μmol·L-1;两药相互作用指数CDI<1.胡椒碱与棉酚联合用药,可引起细胞G0/G1期阻滞和亚二倍体峰(凋亡峰)增加;同时上调细胞周期抑制蛋白p21Cip1的表达,并下调Cyclin D1、Cyclin A、Cyclin B1以及药物代谢酶CYP3A4的表达.结论 胡椒碱与棉酚联用,可能是通过诱导细胞周期阻滞,增强凋亡以及抑制CYP3A4药物代谢酶活性,发挥其协同抗前列腺癌作用.
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PEG-3启动子在前列腺癌细胞DU145中的活性鉴定
目的 探讨PEG-3启动子在前列腺癌细胞DU145中的启动活性.方法 用PCR法扩增PEG-3启动子；在真核表达质粒pShuttle-CMVp-EGFP基础上构建PEG-3启动子调控的、转录绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒pShuttle-PEG3p-EGFP.将2种质粒(pShuttle-PEG3 p-EGFP和pShuttle-CMVp-EGFP)用脂质体分别转染前列腺癌细胞DU145和人正常前列腺上皮细胞RWPE-1,72 h后在荧光显微镜下用Imagepro-Plus6.0分析2种启动子启动绿色荧光蛋白基因的转录活性.结果 重组质粒在前列腺癌细胞DU145中观察到了绿色荧光,在人正常前列腺上皮细胞RWPE-1细胞中无绿色荧光.pShuttle-PEG3p-EGFP和pShuttle-CMVp-EGFP2种质粒在前列腺癌细胞DU145中的荧光强度分别为403.50、130.93.结论 所克隆的PEG-3启动子表现出较强的肿瘤特异性,在前列腺癌细胞DU145中有一定的启动活性,可望开发成为肿瘤靶向性基因治疗工具.
关键词： PEG-3 启动子 前列腺癌细胞DU145 基因治疗
