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小鼠肌肉内绿色荧光蛋白基因电转染
目的:将细胞电通透技术应用到DNA肌肉转染并确定达到高效电转染的参数条件.方法:以增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因质粒作为报告基因,进行小鼠体内肌肉组织电转染实验,在部分参数固定情况下,某一参数发生变化,通过荧光显微镜观察、公式计算得出转染率,进行比较.确定转染的佳电场强度、脉冲时值和质粒剂量.结果:EGFP质粒15 μg注射到小鼠的胫前肌,在注入后给予如下参数,即电脉冲200 V·cm-1,20 ms,1 Hz,8次,转染率高,可达(73.2±7.2)%.EGFP质粒注射后不会在细胞外立即降解,注射质粒DNA 1 h内给予电脉冲不影响转染率;15μg为适当的DNA剂量;EGFP蛋白的表达,7 d达到高峰.结论:与单纯EGFP质粒肌肉注射相比,DNA肌肉电转染可极大地提高其转染率.
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绿色荧光蛋白在寄生虫学研究中的应用
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是一类存在于水母、水螅等腔肠动物体内的生物发光蛋白质,由238个氨基酸组成,分子量为27kDa[1].关于GFP的结构近年来有许多报道[2-3],它是由11个β-折叠围绕着一个α-螺旋而成的圆桶状结构,α-螺旋含有一个3肽(Ser-Tyr-Gly)环化而成的发光基团[4].通过对发光基团和其它区域进行随机诱变,已经得到许多GFP突变体,有的发蓝光,有的发出的荧光比野生型强[5].通过对GFP基因进行密码子优化,得到了能在不同生物高效表达的突变体,如病毒、细菌、寄生虫、酵母、昆虫细胞、植物细胞及哺乳动物细胞等.