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四种嵌合免疫受体在T淋巴细胞中的表达分析
目的 利用基因工程技术构建含人源抗癌胚抗原(CEA)单链抗体(scFv)的4种嵌合免疫受体(CIR),比较其在T淋巴细胞表面表达的情况.方法 将构建好的嵌合免疫受体CIRZ、CIR1、CIR2、CIR3通过电穿孔方法分别转染人T淋巴细胞,流式细胞仪检测各嵌合免疫受体在T淋巴细胞的表达情况.结果 有3种嵌合免疫受体成功表达在T细胞的表面,它们分别是CIR1、CIR2、CIR3,其中CIR3的表达更好.结论 嵌合免疫受体能够在T淋巴细胞的表面有效表达,为下一步的体内实验打下基础,同时为这一治疗策略终应用于临床提供可靠的实验依据.
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人T淋巴细胞CD3ε链的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链.方法 以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆人pCR-Ⅱ载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经GST亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定.结果 酶切分析及DNA测序证实,hCD3ε链基因被正确克隆入pGEX-4T-3载体,并能在原核系统中稳定表达.表达产物的相对分子质量为49 500,0.2mmol/LIPTG 25℃诱导表达4.5 h,目的蛋白的表达量高,占菌体总蛋白的29.3%,其中可溶性表达占12.8%.纯化的融合蛋白纯度可达86.1%,可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别.结论 已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白.
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益血口服液对人免疫细胞及小鼠细胞分裂的影响
目的:研究益血口服液对成人细胞免疫功能及对小鼠骨髓造血细胞有丝分裂的影响.方法:将不同剂量益血宁口服液作用于12名健康男性受试者的外周血淋巴细胞,以氢化可的松为阳性对照,经淋巴细胞转化技术(LTT)处理,以形态学方法考察淋巴细胞转化百分率(LTP);以48只昆明种小鼠分为3组,以丝裂霉素C(MMC)为阳性对照,给药10d后取双侧股骨骨髓细胞,镜检计算其中的有丝分裂指数;同时考察了益血口服液中Fe2+,Zn2+,Cu2+含量.结果:益血口服液对提高细胞免疫功能在此范围有量效关系.对正常状态的动物有促进骨髓造血细胞有丝分裂的作用.结论:本品具有提高细胞免疫功能及促进骨髓造血细胞有丝分裂的作用,Fe2+,Zn2+离子含量较高,可能是其对营养性缺铁性贫血具有治疗效果的药理学基础.
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γ辐射诱发的人AHH-1 T淋巴细胞凋亡及其调控机制
目的:研究电离辐射诱发正常人AHH-1 T淋巴母细胞凋亡的特点及其调控机制, 为辐射免疫损伤的防治提供实验依据.方法:用TUNEL、麦格-姬姆萨(MGG)法、MTT比色法及碱磷酶免疫组织化学染色法, 分别检测T细胞凋亡、细胞活存以及Bax、Bcl-XL和caspase-3重要凋亡相关蛋白的表达及规律.结果:①在一定照射剂量范围内随照射剂量的增加, AHH-1 T细胞凋亡率持续升高, 而细胞活的活存率则急剧下降, 两者均呈现明显的剂量效应关系.②促凋亡蛋白Bax的表达随照射剂量的增加明显增强, 而凋亡抑制蛋白Bcl-XL则呈持续下降的趋势.③活化的凋亡执行蛋白caspase-3的活性随照射剂量的增加显著升高, 与凋亡率呈现明显的相应关系.结论:AHH-1 T细胞的大量凋亡, 可能是辐射导致淋巴细胞急剧减少、机体免疫功能降低的重要原因; Bax、Bcl-XL和caspase-3蛋白在辐射诱发的T细胞凋亡调控中具有重要作用.
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砷在体外对人T淋巴细胞和Jurkat T细胞系的生长抑制作用
目的:通过三氧化二砷在体外对人T淋巴细胞生长的影响,探讨三氧化二砷的免疫毒性和免疫抑制作用的机制.方法:应用正常人外周血T细胞和人Jurkat T细胞作为体外实验模型,观察不同浓度(0.5～100μM)三氧化二砷对正常人淋巴细胞和人Jurkat T细胞的生长影响,并用电镜观察三氧化二砷对人Jurkat T细胞的形态学改变.结果:体外实验结果显示,三氧化二砷在0.5～100 μM浓度范围对正常人T细胞和人Jurkat T细胞的生长有明显的抑制作用,并随着三氧化二砷的浓度增高而抑制作用增强,呈现为剂量-反应关系.三氧化二砷对正常人T淋巴细胞和人Jurkat T细胞的IC50分别为8.05 μM和8.9μM.电镜观察结果提示,三氧化二砷(5 μM,24 h)处理Jurkat T细胞,导致较多细胞出现细胞体积缩小,细胞核内染色质浓集于核膜内面成团块状,或染色体断裂成碎块状,或胞核固缩边缘化等典型的凋亡细胞特征性形态改变.存活的部分细胞线粒体增生,提示细胞功能活跃.同时,见到许多细胞浆内有空泡形成.结论:三氧化二砷在体外能明显地抑制人T淋巴细胞生长,这种生长抑制作用的机制之一是诱导细胞凋亡,可能也是砷的免疫毒性和免疫抑制作用的机制之一.
关键词： 三氧化二砷 人T淋巴细胞 Jurkat T细胞系 体外实验 细胞凋亡
