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肝再生增强因子的作用机制
人和动物血清中存在着促进肝再生的蛋白质因子,早期的研究中统称为肝刺激物质(HSS)[1,2].研究表明,肝再生增强因子(ALR)是HSS的主要成分[1].有关HSS主要功能性成分及其作用机制的研究,不仅有助于了解肝脏再生的生物学机制,而且有助于新型治疗方法的探索.
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转人肝刺激物质基因的肝癌细胞增殖状态研究
本文通过研究转染人肝刺激物质(hepatic stimulator substance, HSS)的肝癌细胞增殖状态, 进一步探讨了该基因的生物学功能.将人HSS基因导入BEL-7402肝癌细胞, 用Northern 和Southern杂交法证实该基因在靶细胞中有稳定表达.并通过测定细胞生长曲线、细胞S期比例和细胞MAPK活性, 观察到转HSS基因BEL-7402细胞增殖发生了改变.实验结果提示, HSS表达的肝癌细胞DNA合成增加、增殖速度加快, 可能与MAPK激活有关.HSS基因表达可促进细胞增殖.
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HSS体外生物学活性测定的MTT比色法优化及改进
筛选测定HSS体外生物学活性的MTT比色法的佳实验条件.分析比较不同条件下MTT显色反应的特点,确定适用于人肝癌细胞株SMMC7721的佳实验条件,并采用优化条件检测不同剂量下HSS的体外生物学活性.结果表明SMMC7721细胞数量与MTT比色法的吸光度成正相关,线性良好.正交实验优化条件为:5×104cells/ml细胞密度,6h后加入HSS,适浓度为100μg/ml,作用36h后加入MTT溶液.MTT用量50μg,孵育时间6h,DMSO溶解反应产物Formazan,于570nm处测定吸光值.在优化条件下测定HSS体外生物学活性,灵敏度明显高于已发表的方法.一定剂量范围内,活性随剂量增加而增大,超过一定剂量后活性反而下降.应用优化的MTT比色法,以SMMC7221细胞株,检测HSS体外生物学活性是一种灵敏而稳定的方法.
关键词： 肝刺激物质 四甲基偶氮唑盐比色法 生物学活性
