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KAI1在原发性肝癌组织中的表达水平及调控机制的初探
目的初探KAI1/CD82在原发性肝细胞癌组织中的表达水平及可能涉及的机制.方法采用多重逆转录聚合酶链反应,对8例原发性肝细胞癌组织和4例肝血管瘤正常组织中KAI1/CD82mRNA表达水平进行半定量检测,并对肝癌细胞株用Bel-7402和SMMC-7721在肿瘤促进剂佛波醇肉桂酸乙酸酯(PMA)和去甲基化试剂5-氮脱氧胞苷作用下KAI1/CD82表达水平及可能涉及的机制进行了初步探讨.结果肝癌癌组织中KAI1/CD82mRNA表达水平(0.70±0.13)较癌旁组织(1.47±0.18)和肝血管瘤的正常肝组织中KAI1/CD82mRNA表达水平(1.53±0.03)呈显著降低(P＜0.05),后两者之间则不存在明显差异.去甲基化试剂5-氮脱氧胞苷使Bel-7402中KAI1/CD82mRNA表达有一定增高,但对SMMC-7721中KAI1/CD82mRNA表达水平无明显作用.PMA对Bel-7402和SMMC-7721中KAI1/CD82mRNA表达具有一定的调节作用.结论原发性肝细胞癌组织KAI1/CD82表达明显降低,可能是癌细胞转移的一个标志,这种表达降低可能涉及到基因甲基化等多种复杂调控的机制.
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KAI1/CD82在肠癌组织中的表达水平及表达机制
目的初探KAI1/CD82在肠癌组织中的表达水平及可能涉及的机制.方法采用多重逆转录聚合酶链反应,对18例肠癌组织和正常肠组织中KAI1/CD 82 mRNA表达水平进行半定量检测.用去甲基化试剂5-氮脱氧胞苷作用于Bel-7402和SMMC-7721肝癌细胞株,然后检测KAI1/CD82 mRNA表达水平.结果肠癌组织中KAI1/CD82 mRNA表达水平(0.78±0.22)较正常肠组织中表达水平(1.53±0.12)显著降低(P<0.05),其中5例肠癌患者有转移,癌组织中KAI1/CD82 mRNA表达水平(0.70±0.24),与未转移组没有显著差异.5-氮脱氧胞苷作用下,SMMC-7721细胞株中KAI1/CD82 mRNA表达水平基本没变,而Bel-7402细胞株KAI1/CD82mRNA表达水平有一定的增高.结论肠癌组织中KAI1/CD82mRNA表达水平较正常肠组织中表达显著降低,这种表达降低可能涉及到甲基化等多种复杂调控的机制.
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雷帕霉素与5-氮脱氧胞苷对小鼠大肠癌的联合抑制及机制
目的 探讨雷帕霉素(RPM)与5-氮脱氧胞苷(5-aza-dC)对小鼠大肠癌的联合抑制作用及机制.方法 应用二甲基肼(DMH)颈后皮下注射20周建立小鼠大肠癌模型.从第16周起给予RPM、5-aza-dC以及RPM+5-aza-dC腹腔注射,共8周;至试验24周处死实验动物,测算肿瘤体积,以HE染色判断肿瘤发生率;应用免疫组织化学法(IHC)检测肿瘤组织mTOR、p70s6K、4E-BP1蛋白的磷酸化水平.结果 RPM、5-aza-dC及RPM+5-aza-dC干预组小鼠大肠癌发生率显著低于模型组;RPM及RPM+5-aza-dC干预组肿瘤体积明显小于模型组;5-aza-dC干预组肿瘤组织的mTOR磷酸化水平,以及RPM干预组mTOR、p70s6K、4E-BP1蛋白磷酸化水平显著低于模型组.在降低肿瘤发生率、减小肿瘤体积以及抑制mTOR信号通路活性方面,RPM+5-aza-dC作用组的效果显著优于RPM及5-aza-dC单独作用组.结论 RPM与5-aza-dC可联合抑制小鼠大肠癌的发生和生长,其作用机制可能涉及对mTOR信号转导通路相关蛋白磷酸化水平的调控.
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DNA甲基化酶抑制剂与雷帕霉素对人结直肠癌细胞周期及mTOR信号转导通路的联合作用
目的 探讨5-氮脱氧胞苷(5-aza-Dc)与雷帕霉素(RPM)对人结直肠癌细胞的联合作用及机制.方法 应用MTT比色法检测5-aza-Dc与RPM对3种人结直肠癌细胞株的生长抑制作用;应用流式细胞术检测两者对细胞周期的调控;应用免疫印迹法检测两者对于Mtor信号转导通路相关蛋白的影响.结果 5-aza-Dc与RPM对人结直肠癌细胞株SW480、HT29和HCT116均有生长抑制作用,在相同作用条件下,5-aza-Dc与RPM的联合抑制效果明显优于两者单独用药.5-aza-Dc与RPM单独或联合用药对3种细胞的生长周期均具有调控作用(P＜0.05),但作用位点不尽相同.5-aza-Dc与RPM可下调Mtor、p70s6K、4E-BP1蛋白的磷酸化水平,对蛋白的总体水平无明显影响,以两者的联合作用为显著.结论 5-aza-Dc与RPM可联合抑制人结直肠癌细胞株SW480、HT29和HCT116的生长,并阻滞其细胞周期进程.其作用机制可能与影响Mtor信号转导通路蛋白磷酸化水平有关.
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胃癌细胞系中甲基化与叶酸干预对多种基因的调控
目的:研究人胃癌细胞系癌基因及抑癌基因甲基化作用.方法:培养3种人胃癌细胞系MKN-45、MKN-28、HGC-27,分别以不同浓度的甲基转移酶抑制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza-dC)和叶酸干预细胞.以RT-PCR方法检测p16INK4A、p21WAF1、p73、c-myc、c-Ha-ras等多种基因的表达情况.结果:抑癌基因中p16INK4A在干预前MKN-45和HGC-27细胞表达,MKN-45细胞在10 mol/L浓度24 h及72 h后p16INK4A表达增强,HGC-27细胞在5μmol/L和10 μxmol/L组24 h后表达增强.p21WAF1达水平没有改变.所有胃癌细胞系中叶酸干预及叶酸联合5-aza-dc干预前后所有基因的mRNA表达没有明显变化.结论:在人胃癌细胞系MKN-45和HGC-27细胞系中,p16INK4A的表达受DNA甲基化调控,但在MKN-28细胞系不存在这种现象.
