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ASK1在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用
目的 探讨细胞凋亡信号调节蛋白1 (ASK1)在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用.方法 原代培养得到高纯度(＞96％)大鼠脊髓星形胶质细胞,建立星形胶质细胞损伤模型.星形胶质细胞损伤后立即给予生理盐水(损伤模型组)、ASK1特异性抑制剂(Trx组)、ASK1特异性抗体(抗体中和组)处理;对照组为原代大鼠脊髓星形胶质细胞,不作任何处理.应用蛋白质印迹法检测星形胶质细胞标志蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况,应用免疫荧光标记技术检测星形胶质细胞划痕宽度的变化,应用CCK-8法检测星形胶质细胞增殖活性.结果 损伤后24 h及72 h损伤模型组GFAP和Vimentin蛋白的表达均显著高于对照组、Trx组和抗体中和组(P＜0.01);损伤后24 h及72 h损伤模型组星形胶质细胞划痕平均宽度明显小于对照组、Trx组和抗体中和组(P＜0.01);损伤后12h、24 h、72 h对照组、Trx组和抗体中和组星形胶质细胞增殖活性明显低于损伤模型组(P＜0.05).结论 大鼠脊髓星形胶质细胞损伤后阻断ASK1可抑制其细胞增生.
关键词： 星形胶质细胞 细胞凋亡信号调节蛋白1 细胞增殖 胶质纤维酸性蛋白 波形蛋白 -
细胞凋亡信号调节蛋白1对大鼠脊髓损伤后GFAP、vimentin表达及后肢运动功能的影响
目的：探讨细胞凋亡信号调节蛋白1（ASK1）对大鼠脊髓损伤（SCI）后胶质瘢痕中中间丝蛋白胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和波形蛋白（vimentin）的表达及损伤大鼠后肢行为学和电生理变化的影响。方法采用大鼠脊髓夹伤模型，设ASK1特异性抑制剂Thioredoxin组（Trx组）、ASK1单克隆抗体组（Anti-ASK1组）、生理盐水对照组（Model组）及假手术组（Sham组），于损伤即刻在损伤局部分别给予Thioredoxin、ASK1单克隆抗体、生理盐水各10μl，Sham组大鼠仅打开椎板暴露脊髓，不造成SCI。各组大鼠定期（SCI后1、7、14、28 d）应用Western blot和免疫荧光法检测GFAP、vimentin的表达，BBB评分检测大鼠后肢行为学变化，体感诱发电位及运动诱发电位检测电生理的变化。结果 SCI后1 d各组GFAP、vimentin的表达无明显差异，7、14、28 d Trx组、Anti-ASK1组GFAP、vimentin的表达较Model组明显下降（P<0.01）；SCI后1、7、14 d各组BBB评分及体感诱发电位、运动诱发电位无明显差异，SCI后28 d，Trx组、Anti-ASK1组BBB评分较Model组明显升高（P<0.01），体感诱发电位及运动诱发电位潜伏期明显缩短，波峰值明显升高（P<0.01或P<0.01）。结论抑制ASK1可减弱大鼠SCI胶质瘢痕局部GFAP、vimentin的表达，并可促进大鼠后肢运动功能的恢复和电生理的改善。
关键词： 脊髓损伤 细胞凋亡信号调节蛋白1 胶质纤维酸性蛋白 波形蛋白 -
ASK1在大鼠脊髓损伤后炎症因子介导继发损伤中的机制研究
目的 探讨细胞凋亡信号调节蛋白1(ASK1)在炎症因子介导的大鼠脊髓损伤(SCI)中的作用.方法 采用大鼠脊髓夹伤模型,48只大鼠分为假手术组(Sham组)、生理盐水组(Saline组)及炎症因子组(Cytokine组),用Western blot法检测ASK1和磷酸化的ASK1 (pASK1)的表达,用BBB评分及Grid Walking法检测后肢行为学变化,用体感诱发电位(SEP)及运动诱发电位(MEP)检测电生理变化.结果 SCI后1周各组ASK1 mRNA及蛋白水平的表达无明显变化,Cytokine组pASK1的表达较Saline组显著上调(P=0.002);SCI后3、4周时,Cytokine组BBB评分较Saline组明显下降(P=0.000、0.000);SCI后4周,与Saline组相比,Cytokine组大鼠后肢踏空率增加(P=0.032),SEP及MEP潜伏期延长(P=0.043、0.045),波峰值无显著变化(P=0.889、0.434).结论 炎症细胞因子可导致大鼠SCI后后肢运动功能障碍加重,机制可能与ASK1磷酸化水平升高有关.
关键词： 脊髓损伤 大鼠 细胞凋亡信号调节蛋白1 炎症细胞因子
