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基于TaqMan探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌
目的 建立基于TaqMan探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌的方法.方法 根据甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)、乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B,SPB)、丙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi C,SPC)和伤寒沙门菌(Salmonella typhi,ST)的特异序列分别设计引物SPAP、SPBP、SPCP和STP,在探针的5'端分别标记TET、ROX、FAM、HEX,建立基于TaqMan探针四重荧光PCR检测方法.结果 SPAP、SPBP、SPCP和STP分别扩增出5株SPA、4株SPB、7株SPC和11株ST,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性.SPAP、SPBP、SPCP和STP扩增效率分别为84.5%、101.8%、92.4%和90.9%,线性相关系数(R2)分别为0.996、0.975、0.996和0.984.结论 建立的方法特异性高、敏感性强,可用于SPA、SPB、SPC和ST的特异性检测.
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改良分子信标-实时荧光PCR同时检测猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌
目的 建立猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,应用于食品和食物中毒病人标本的猪霍乱沙门菌检测以及沙门菌属C群的鉴别诊断.方法 根据GenBank公布的猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的保守序列(CP000857.1),设计引物和改良分子信标探针,优化PCR程序和PCR成分,以11种细菌为对照,建立实时荧光PCR检测方法,并用71株常见血清型的沙门菌评价该方法的灵敏度和特异性,所建立的方法应用于70份食品样品的检测.结果 该改良分子信标一荧光PCR方法的DNA低检出限为10fg/反应体系,菌液低检出限为20 CFU/反应体系;无交叉荧光信号产生.针对目标菌均出现特异荧光信号.对71株沙门菌属的检测,该方法的灵敏度和特异度为100%.70份食品样品用荧光PCR和传统方法检测猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌,结果均为阴性.该方法从菌株的核酸提取到检测仅需1.5小时,从样品处理到检测仅需1天时间.结论 建立的实时PCR检测方法快速、灵敏度高、特异性强,可用于食品及食物中毒标本的猪霍乱沙门菌检测以及沙门菌属C群的鉴别诊断,保障食品安全.
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一起食源性疾病暴发的病原学研究
目的 检验分析某食源性疾病暴发的病原菌,为疫情的快速处置提供依据.方法 对7份可疑留样食品和2例患者的排泄物同时进行直接培养、增菌分离培养,对分离的可疑菌株进行生化和血清学试验鉴定,并用VITEK-2全自动微生物分析仪对分离菌株鉴定复核和药敏试验.结果 9份样品中,2份食品和2份患者的排泄物中均检出沙门菌,经生化试验和血清学试验与全自动微生物分析仪鉴定,证明该沙门菌为丙型副伤寒沙门菌.4株分离菌对氨苄西林、复方新诺明、四环素、阿莫西林耐药.结论 引起本次食源性疾病暴发的病原菌为丙型副伤寒沙门菌.
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汤卜逊沙门菌暴发分离株的鉴定及与丙型副伤寒沙门菌的鉴别
目的 探讨丙型副伤寒、猪霍乱以及汤卜逊沙门菌的血清型鉴定要点,评价不同诊断血清的鉴定能力.方法 用三家不同生产厂家的沙门菌诊断血清对丙型副伤寒、猪霍乱、猪霍乱库氏变种沙门菌三株标准株以及GSS中国区监测的疑似丙型副伤寒暴发分离株、猪霍乱和汤卜逊沙门菌进行血清鉴定,同时利用PCR、生化、以及MLST分型分析对这些菌株进行辅助分析.结果 血清分型显示暴发菌株为汤卜逊沙门菌,那些原来鉴定为猪霍乱沙门菌的菌株也是汤卜逊沙门菌;PCR结果 显示这些暴发菌株和散发菌株的Vi基因为阴性;还发现某些诊断血清的H:c因子血清能够与H:k抗原发生交叉凝集,从而导致血清型的误判;另外,MLST分型分析显示这些汤卜逊沙门菌菌株与丙型副伤寒、猪霍乱等沙门菌之间有差异;卫矛醇、粘液酸和H2S 三种生化反应显示丙型副伤寒、猪霍乱、猪霍乱库氏变种沙门菌之间具有明显的生化差别.结论 近期我国报告为丙型副伤寒的暴发中,需要鉴定是否为汤卜逊沙门菌所致,注意诊断血清的交叉反应所致的误判,可用生化鉴定、MLST分型分析以及PCR等方法 进一步鉴定.
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实时荧光PCR技术在沙门菌种间鉴别中的应用
目的 探讨用实时荧光PCR对沙门菌进行种间鉴别.方法 根据猪霍乱沙门菌(Salmonella Choleraesuis,SC)和丙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi C,SP)的共有序列(GenBank:AE017220.1),伤寒沙门菌(Salmonella Typhi,ST;GenBank:NC_016832.1)和鸡伤寒沙门菌(Salmonella Gallinarum,SG;GenBank:HQ703462)的特异序列分别设计SCP、STP、SGP引物和TaqMan探针,在探针的5'端分别标记FAM、HEX、TET,建立基于TaqMan探针多重荧光PCR检测方法.同时,根据SC和SP差异序列(GenBank:CP000857)设计SPP引物和探针,在探针的5'端标记ROX,区分SC和SP.结果 SCP特异性扩增出25株SC和22株SP,STP和SGP分别扩增出31株ST和34株SG,而其他不同血清型沙门菌和非沙门菌扩增结果阴性.SPP扩增出22株SP,25株SC扩增结果阴性.扩增体系评价结果,SCP、STP、SGP和SPP扩增效率均在80％ ～ 100％,线性相关系数r2≥0.994.结论 建立的方法特异性强、敏感性高,可用于SC、SP、ST、SG的种间鉴别.
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一起由婴儿与丙型副伤寒沙门菌引起食源性疾病的调查
目的:查明2009年重庆万州区一起因丧宴引发食源性疾病爆发的原因,总结经验教训,为预防控制提供依据.方法:对就餐者和病例进行流行病学个案调查,采集剩余食物、餐具、病人和食品从业人员肛拭进行实验室检测,对现场调查资料应用描述性流行病学和卫生统计学方法进行分析.结果:本起食源性疾病共发病22例,罹患率为7.38%;发病以20岁-49岁年龄的青壮年为主;平均潜伏期20小时;同时从现场采集的样品中,检出4株丙副伤寒沙门菌、3株婴儿沙门菌.结论:此次食源性疾病是由婴儿与丙型副伤寒沙门菌污染食物、餐具等所引起的局部爆发.
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伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重PCR及荧光PCR分型方法的建立与评价
目的 建立伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的快速和特异的检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定.方法 根据GenBank公布的伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的保守序列设计引物和改良分子信标探针,建立多重PCR检测方法和实时荧光PCR检测方法.结果 采用所建立的多重PCR方法可分别检测到伤寒的3条特异性条带、甲型副伤寒沙门菌的2条特异性条带和丙型副伤寒沙门菌的1条特异性条带,但是乙型副伤寒沙门菌未出现特异性条带.建立的实时荧光PCR方法可以快速、特异、灵敏地检测出伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,纯DNA和菌液的低检出限分别可达10 fg/reaction和20 CFU/reaction；对77株细菌的检测正确率达100％.结论 建立的实时荧光PCR检测方法比多重PCR方法更能快速、特异、灵敏地检测伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌.
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实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用
目的 建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定.方法 根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法.结果 检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的低检出限分别可达10fg和20 CFU/反应体系；特异性好,对71株细菌的检测符合率达100％.20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符.70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出.结论 建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌.
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一起食物中毒实验室病原体查找分析
目的 对一起疑似食物中毒进行病原学检测和中毒原因分析.方法 对疑似食物中毒病人和环境样品采样,参考食品微生物检测国家标准进行病原分离鉴定和污染来源分析.结果 确认是由丙型副伤寒沙门菌引起的食物中毒.结论 提示我们要严格按照《食品卫生法》的要求,加强监督、监测和宣传工作,增强人民群众的卫生防病知识,减少食物中毒事件的发生.
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一起食源性疾病暴发的病原学检测
目的 查明一起细菌性食源性疾病暴发的病原学,为突发公共卫生事件处置提供科学依据.方法 按照GB/T4789-2008进行沙门菌等肠道病原菌检测.结果 12份样品中检出7株沙门菌,检出率为58.33％,5份病人肛拭子中分别检出3株丙型副伤寒沙门菌、2株婴儿沙门菌；剩余混合凉菜中检出婴儿沙门菌1株；餐碗物表样中检出丙型副伤寒沙门菌1株；其余样品中均未检出致病菌.结论 此次食源性疾病暴发系聚餐者误食被丙型副伤寒沙门菌或婴儿沙门菌污染的食物或餐具所致.
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丙型副伤寒沙门菌致脊柱骨髓炎一例
1 病例介绍患者 男,64岁.因腰背疼痛、活动受限伴畏寒、发热17d于2010年6月8日入院.患者于扛重物后出现腰痛,翻身、站立、行走困难,无双下肢痛、麻,伴畏寒、发热、便秘.于当地医院给予静脉滴注头孢噻肟及止痛等对症治疗后症状缓解,但下床活动困难,停药后又出现畏寒、发热.入院查体:体温38.0℃,脉搏74次/min,呼吸18次/min,血压120/70 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa);浅表淋巴结未扪及肿大.
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丙型副伤寒沙门菌的灭活工艺
目的：优化甲醛对灭活丙型副伤寒沙门菌原液的条件，确定灭活工艺参数。方法在37℃条件下，比较不同甲醛浓度、灭活时间对丙型副伤寒沙门菌原液的灭活效果，依据无菌检查、外观以及效价测定的结果，确定丙型副伤寒沙门菌原液的灭活工艺参数，并对该工艺进行细菌灭活验证。结果不同菌株制成的丙型副伤寒沙门菌液，当稀释至一定浓度（＜1000×108 cfu／mL）后，采用终体积分数为1％的甲醛溶液，经37℃灭活48 h，可达到完全灭菌的效果，同时维持了抗原的稳定性。结论经过条件优化，确定了丙型副伤寒沙门菌灭活的工艺参数，完善了关键技术。
