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脑池内预应用肿瘤坏死因子-α对帕金森病小鼠黑质多巴胺神经元的影响及其机制
目的:研究脑池内预应用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病小鼠黑质多巴胺神经元的影响及可能作用机制.方法:实验于2003-09/2004-03在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室进行.以MPTP诱导小鼠帕金森病模型,各干预组脑池内预注入TNF-α(0.1,2.0,100.0 ng),24 h后皮下注射MPTP40mg/(kg·d),连用5 d,并设对照.观察小鼠行为学改变,免疫细胞化学染色法检测黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元及活化型caspase-3阳性细胞.结果:模型组小鼠黑质TH阳性神经元[(22.429±7.254)/个]比对照组[(64.286±13.487)个]明显减少(t=6.676 4,P＜0.001),模型组与对照组相比活化型caspase-3表达上调(P＜0.001);各干预组与模型组相比,黑质TH阳性神经元明显减少(P＜0.05),而且活化型caspase-3阳性细胞表达上调(P＜0.05).结论:脑池内以TNF-α预处理MPTP小鼠,使黑质多巴胺神经元损伤加重,其途径可能与caspase-3引起的细胞凋亡相关.
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多巴胺D2受体缺失加剧MPTP诱导的小鼠帕金森病样改变
目的 探讨多巴胺D2受体与帕金森病的运动行为学及发病间的关系.方法 C57BL/6野生型及D2受体基因敲除小鼠腹腔注射1-甲基-4苯基1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病模型,爬杆实验、游泳实验观察比较两组小鼠行为学的改变,免疫荧光染色法观察小鼠中脑黑质致密部TH阳性神经元数目的变化.结果 MPTP注射后,小鼠爬杆实验时间延长,游泳实验评分降低,中脑黑质致密部TH阳性神经元数目下降(P＜0.05或P＜0.01);且D2受体基因敲除小鼠的行为学改变及TH神经元数目的减少较野生型小鼠更为明显(P＜0.05或P＜0.01).结论 多巴胺D2受体在小鼠肢体运动协调方面起着重要作用,D2受体缺失加剧了MPTP诱导的小鼠帕金森病样改变.
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依达拉奉对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用
目的 探讨依达拉奉(edaravone)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的C57BL/6J帕金森病模型小鼠的保护作用及相关机制.方法 90只雄性C57BL/6J小鼠随机分为依达拉奉组(ED组)、帕金森病模型组(PD组)和生理盐水对照组(NS组),每组30只.ED组和PD组小鼠给予皮下注射MPTP建立PD模型后,ED组给予依达拉奉(3 mg/kg)治疗.用滚轴实验检测小鼠的旋转次数,用免疫组织化学实验检测小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达,用RT-PCR和免疫印迹实验分别检测小鼠黑质脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA与蛋白的表达.结果 与NS组比较,ED组、PD组小鼠在滚轴实验中的旋转次数下降(P＜0.05,P＜0.01),黑质TH表达减少(P＜0.05,P＜0.01),黑质BDNF的mRNA(P均＜0.01)和蛋白(P均＜0.05)表达降低;与PD组比较,ED组小鼠在滚轴实验中的旋转次数增加(P＜0.05),黑质TH表达增加(P＜0.05),黑质BDNF的mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.05)表达升高.结论 依达拉奉可增加C57BL/6J PD模型小鼠黑质区BDNF的mRNA及蛋白表达,降低MPTP对小鼠黑质的损伤,对多巴胺能神经元有保护作用.
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磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病模型小鼠黑质NF-κB p65表达的影响
目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质NF-κB p65的表达调控作用.方法 应用MPTP建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质抗酪氨酸羟化酶(TH)、NF-κB p65及p-ERK1/2的表达变化；并观察给予ERK特异性抑制剂U0126后对上述变化的影响.结果 模型组小鼠于MPTP第3次注射后1h,黑质区p-ERK1/2阳性细胞数多于NF-κB p65阳性细胞,第5次注射后24 h,NF-κB阳性细胞增多,p-ERK1/2阳性细胞减少,同时伴有TH阳性神经元丢失；给予ERK特异性抑制剂U0126后,上述变化明显减轻.结论 在MPTP所致PD小鼠模型中ERK1/2信号通路可能通过调控NF-κB p65活化从而导致多巴胺能神经元变性丢失.
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颈内动脉注射MPTP制作偏侧恒河猴帕金森病模型研究
目的探讨经颈内动脉注射MPTP制作偏侧恒河猴帕金森病模型的稳定技术和方法.方法对10只健康恒河猴注射MPTP,其中5只行颈外动脉夹闭,颈总动脉注射:5只行颈总动脉穿刺插管颈内动脉给药.其中1只模型动物在造模前后行正电子发射断层显像(PET)检查,观察脑代谢改变情况.对模型动物脑标本行快速冷冻切片,采用免疫组织化学方法检测多巴胺能细胞变化.结果采用颈总动脉插管颈内动脉注药建模均一次成功;2只颈外动脉夹闭颈总动脉注射药物建模一次成功,不成功的3只采用颈总动脉插管至颈内动脉再次注入相同剂量MPTP后建模成功.PET显示模型侧基底核区低代谢,与术前相比明显不同.免疫组化检测示模型侧中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞形态改变,数量减少,与对照侧有明显差异.结论与颈外动脉夹闭颈总动脉注射相比,颈总动脉插管颈内动脉注射MPTP制作偏侧恒河猴帕金森病模型更为简单有效.
