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β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响
背景:通过调节神经干细胞分化过程中的tau 蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果.目的:观察β-淀粉样蛋白25～35 和人参皂苷Rb1 对神经干细胞分化过程中tau 蛋白磷酸化水平的影响.方法:分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3 代神经干细胞分化1 周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396]、Tau[pS262]及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况.结果与结论:正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25～35 可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1 可以逆转β-淀粉样蛋白25～35 的作用.提示β-淀粉样蛋白25～35 和人参皂苷Rb1 通过调节GSK-3β的活性对tau 蛋白的磷酸化水平产生调控作用.
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多奈哌齐对Aβ25～35诱导神经毒性的保护作用
目的 观察胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐对Aβ25～35诱导的神经毒性的影响及其可能机制.方法 PC12细胞常规培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测0、0.5、1、5、10、20、50 μmol/L β-淀粉样蛋白(Aβ)25～35或多奈哌齐对细胞活力的影响;1、5、10、20、50 μmol/L多奈哌齐预处理细胞2h后再加入20 μmol/L Aβ25～35,同时设正常对照组和单纯Aβ25～35组,MTT法检测各组细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化;10 μmol/L蛋白激酶C(PKC)的抑制剂GF109203X作用细胞30 min后加入10 μmol/L多奈哌齐,同时设正常对照组、单纯GF109203X组和多奈哌齐组,Westem blotting检测各组磷酸化PKC(P-PKC)、磷酸化PKC底物(P-MARCKS)的表达;免疫荧光染色检测10 μmol/L多奈哌齐作用2h和正常对照细胞PKCα、PKCε亚型的表达.结果 5、10、20、50 μmol/L的Aβ25～35 作用于PC12细胞24 h后可以引起细胞活力下降,差异有统计学意义(P＞0.05).与正常对照组比较,20 μmol/L Aβ25～35组细胞活力下降、LDH释放增加;与Aβ25～35组比较,Aβ 25～35+5、10、20、50μmol/L多奈哌齐组细胞活力增加,LDH释放下降,差异有统计学意义(Ｐ＜0.05).Western blotting检测结果显示,与正常对照组相比,10 μmol/L多奈哌齐组P-PKC和P-MARCKS的表达增加;与多奈哌齐组相比较,GF109203X+多奈哌齐组P-PKC和P-MARCKS的表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05);免疫荧光染色证实正常对照组PKCα和PKCε较多地在细胞浆内表达,多奈哌齐组PKCα 和PKCε在膜部分表达增多.结论 多奈哌齐可以拮抗Aβ25～35的神经毒性作用,激活PKC表达可能是其发挥保护作用的机制之一.
关键词： 多奈哌齐 β-淀粉样蛋白25～35 阿尔茨海默病 蛋白激酶C
