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不同质量浓度粒巨噬细胞集落刺激因子对Lewis大鼠骨髓源性树突状细胞诱导分化的影响
背景:体内成熟和不成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)数景极少,仅占外周血单核细胞的1%,占脾细胞的0.2%～0.5%,几乎不能直接从体内分离出大量的纯化的DC,要获得足够的DC,只有依靠体外培养增殖.目的:以不同剂量粒巨噬细胞集落刺激因子诱导分化获得大鼠骨髓源性DC,拟建立合适的大鼠骨髓源性未成熟DC的培养方法.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/2008-05在苏州大学附属第一医院临床免疫学实验室和附属儿童医院骨科实验室完成.材料:雄性SPF级Lewis大鼠用于培养骨髓源性DC,雄性SPF级Brown Norway大鼠用于混合淋巴细胞反应实验.方法:采用密度梯度离心法从Lewis大鼠股骨和胫骨获取骨髓源性单个核细胞,分别以2.5,5,10,20 μg/L粒巨噬细胞集落刺激因子和5μg/L白细胞介素4诱导分化获得大鼠骨髓源性DC,采用黏附法纯化DC.主要观察指标:以流式细胞仪分析DC表型.混合淋巴细胞反应中以Lewis大鼠DC作为刺激细胞,以Brown Norway大鼠脾脏T细胞作为反应细胞,检测其刺激同种T细胞增殖能力.ELISA测定分泌细胞上清液中白细胞介素12、干扰素水平.结果:随粒巨噬细胞集落刺激因子质量浓度的增高,诱导的细胞获得率逐渐升高,但DC比例逐渐下降.CD86、MHC-Ⅱ表达阳性率随培养时间延长逐渐增加.培养第5,7天,DC不能有效刺激同种异体T细胞的增殖反应,培养第13天,DC刺激同种异体T细胞的增殖反应能力明显增强(P＜0.01).培养7 d以后,DC上清液中自细胞介素12水平明显增高(P＜0.01),脂多糖刺激以后升高更加明显(P＜0.01).脂多糖刺激后DC表型MHCⅡ、CD86表达明显增加,白细胞介素12分泌增加,刺激同种T细胞增殖能力轻度增强.结论:5 μg/L粒巨噬细胞集落刺激因子为诱导大鼠骨髓源性未成熟DC的佳剂量,培养9 d可以获得足够数量和纯度的未成熟DC.
关键词： 树突状细胞 骨髓 大鼠 粒巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素4 -
高胆血红素血症新生儿细胞因子表达水平的探讨
目的:探讨某些细胞因子在病理性高胆血红素血症新生儿中临床意义.方法:将病理性高胆血红素血症新生儿分为3组,无菌采集病理性高胆血红素血症新生儿股动脉血清,均采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测定TNF-α、TNF-β、GM-CSF、sIL-2R的表达水平.结果:①高胆一组与高胆二组细胞因子比较,仅GM-CSF有显著性统计学意义(P＜0.01).②高胆一组与高胆三组细胞因子比较,仅TNF-α有显著统计学意义(P＜0.01).③高胆二组与高胆三组细胞因子比较,TNF-α、TNF-β、GM-CSF有显著统计学意义(P＜0.01).④高胆三个组与正常组比较,TBIL、DBIL、TNF-α、TNF-β、GM-CSF均有显著统计学意义(P＜0.01),仅sIL-2R无统计学意义(P＞0.05).结论:TNF-α、TNF-β、GM-CSF可做为病理性高胆血红素血症新生儿诊疗指标,为围产期病理性高胆血红素血症新生儿早期干预及其保健提供基础免疫学理论依据.
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高级别脑胶质瘤术后同步会师化放疗联合粒巨噬细胞集落刺激因子治疗效果观察
目的 探讨高级别脑胶质瘤术后同步会师化放疗联合粒巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)治疗的效果及安全性.方法 92例显微手术全切经组织病理确诊为高级别脑胶质瘤患者随机分为2组,对照组46例术后应用尼莫司汀瘤腔联合替莫唑胺会师化疗同步放疗,观察组46例在对照组基础上给予GM-CSF治疗.记录2组治疗后3、6、9个月卡氏功能状态评分(Karnofsky performance status,KPS),随访观察无进展生存期及临床不良反应.结果 观察组治疗6、9个月后KPS评分(75.38±8.96、79.81±8.28)均高于对照组(70.50±9.04、75.25±9.60)(P＜0.05),观察组无进展生存期[(7.76±1.97)个月]较对照组[(6.93±1.76)个月]延长(P＜0.05);随访期间2组均未发生Ⅲ度以上不良反应,观察组骨髓抑制发生率(10.87％)低于对照组(27.27％)(P＜0.05).结论 高级别脑胶质瘤术后同步会师化放疗联合GM CSF治疗可延长患者术后无进展生存期,提高生存质量,降低不良反应,改善预后.
关键词： 高级别脑胶质瘤 粒巨噬细胞集落刺激因子 无进展生存期 不良反应 -
低剂量粒巨噬细胞集落刺激因子培养小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞的实验研究
目的建立小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(DC)的培养方法,并初步观察其生物学特性.方法分别用常规剂量和低剂量粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)培养小鼠骨髓源性DC,对其进行形态学观察和细胞表型检测,检测其在体外刺激同种异体T细胞增殖的能力,同时比较不同剂量GM-CSF下培养细胞内IL-10和TGF-β mRNA的表达水平.结果常规剂量GM-CSF培养出的DC为成熟DC和未成熟DC的混合体,经脂多糖(LPS)刺激后迅速分化成熟,表型为CD11c+、CD25±、CD80+、CD86+、MHCⅡhi,在体外可强烈刺激同种异体T细胞分化增殖;而低剂量GM-CSF培养出的DC为较单纯的未成熟DC,LPS不能刺激其分化成熟,表型为CD11c+、CD25-、CD80-、CD86-、MHCⅡlow,不能有效活化刺激同种异体T细胞,其IL-10 mRNA表达水平明显高于其他细胞.结论用低剂量GM-CSF可培养出表型和功能均未成熟的小鼠骨髓源性DC,其自身高水平分泌IL-10可能是其成熟障碍的原因.
关键词： 树突状细胞 粒巨噬细胞集落刺激因子 免疫耐受 -
血小板膜受体检测方法的建立及细胞因子的作用研究
目的建立流式细胞术检测血小板膜蛋白GMP-140的实验方法,分析血小板生成素(TPO)与GM-CSF因子对血小板膜糖蛋白GMP-140表达的影响.方法以生理盐水、TPO溶液及GM-CSF溶液为对照和实验条件与血小板孵育,加入荧光标记的单克隆抗体,应用流式细胞术检测血小板膜蛋白GMP-140的表达率.结果 125 ng/ml TPO实验组GMP-140表达率与对照组相比有显著性差别(P＜0.001);100 ng/mlGM-CSF实验组与对照组相比无显著性差别(P＞0.5).结论成功建立了流式细胞术检测血小板膜蛋白GMP-140的实验方法.TPO在一定浓度下对血小板有刺激激活作用,100ng/ml浓度的GM-CSF在体外直接作用于血小板对其无明显刺激作用.
关键词： 颗粒膜蛋白-140 血小板生成素 粒巨噬细胞集落刺激因子 流式细胞术
