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绿色荧光蛋白载体文献资料
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RNA干扰技术建立人PARP-1缺陷细胞株
目的建立并鉴定聚ADP-核糖聚合酶1(hPARP-1)缺陷细胞株,用于研究hPARP1 基因的作用机制及其缺陷与DNA损伤发生的关系.方法将用已经构建的pEGFP-C1-shRNA(包含两个PARP1基因及一个阴性对照)转染支气管上皮细胞(16-HBE),使之在16-HBE中表达,转染后命名为16-HBEP1、16-HBEP2及16-HBEN.用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hPARP1 基因的表达水平.结果 pEGFP-C1-shRNA在真核细胞成功表达; 16-HBEP1和16-HBEP2的蛋白表达水平分别下降了84.3%及63.7%.结论 hPARP1缺陷细胞株的成功建立和鉴定为hPARP1基因功能研究提供了一种有效手段.
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DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株的建立
目的建立并鉴定DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株,用于研究hMSH2基因的作用机制及其缺陷与肿瘤发生的关系.方法运用基因工程的方法获得hMSH2 cDNA片段,并反向克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上,随后将构建好的hMSH2反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体转染入人胚肺成纤维细胞(HLF),使之在HLF中表达,用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hMSH2基因的表达水平.结果构建了hMSH2反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体,并在真核细胞成功表达;hMSH2酶缺陷细胞株hMSH2基因的蛋白表达水平下降了44%.结论 hMSH2缺陷细胞株的成功建立和鉴定为hMSH2基因功能研究提供了一种有效手段.
