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红景天苷对心肌缺血再灌注大鼠心肌梗死面积及细胞凋亡的影响
目的：观察红景天苷对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌梗死面积及心肌细胞凋亡的影响,探讨大株红景天抗 MIRI的作用。方法将 SD大鼠按照随机数字表法分为6组,每组6只：假手术组(Sham)、心肌缺血再灌注模型组(I/R)、红景天苷预防组(红景天苷+缺血再灌注,S+I/R)、红景天苷治疗组(缺血再灌注+红景天苷,I/R+S)、红景天苷预防组+磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂 LY294002组(S+I/R+LY组)、红景天苷治疗组+PI3K特异性抑制剂 LY294002组(I/R+S+LY组)。红景天苷预防组和预防组+LY组造模前连续给药3 d；红景天苷治疗组和治疗组+LY组再灌注即刻加予红景天苷；Sham组和 I/R组均给予等量生理盐水腹腔注射；预防+LY 组和治疗+LY 组于冠脉左前降支(LAD)结扎前30 min 腹腔注射 PI3K 特异性抑制剂LY294002。心肌缺血30 min再灌注24 h后,迅速摘取大鼠心脏留取心室,运用 Evans’blue及 TTC法双重染色,确定心肌梗死区和缺血区面积；运用末端标记法(TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡并计算心肌细胞凋亡指数。结果与 I/R组比较,红景天苷预防组和治疗组均能显著缩小 MIRI大鼠的心肌梗死面积(P<0.05),TUNEL法检测阳性细胞核显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)；与预防组和治疗组比较,预防+LY组及治疗+LY组心肌梗死面积显著扩大,细胞凋亡指数显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论红景天苷能有效减少 MIRI大鼠心肌梗死面积和心肌细胞凋亡指数。
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PI3K特异性抑制剂LY294002增强rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用
目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）参与非小细胞肺癌A549细胞株抵抗重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rsTRAIL）蛋白诱导凋亡的机制，寻找增强 rsTRAIL 蛋白杀伤非小细胞肺癌细胞的新方法。方法：选取对数生长期 A549细胞，随机分为 rsTRAIL蛋白组和 PI3K特异性抑制剂 LY294002联合 rsTRAIL蛋白（LY294002＋rsTRAIL蛋白）组。MTT法检测2组 A549细胞生长抑制率，流式细胞技术检测2组 A549细胞周期和细胞凋亡的变化，蛋白质印迹法检测2组 A549细胞中 p-Akt（Ser473）、c-FLIPL、Bcl-2和 Bax蛋白表达水平。结果：与 rsTRAIL蛋白组（5.16％±0.32％）比较，LY294002＋rsTRAIL蛋白组 A549细胞生长抑制率（74.6％±2.63％）明显升高（P＜0.05）。与 rsTRAIL 蛋白组比较，LY294002＋rsTRAIL 蛋白组处理2 h 后G0/G1期A549细胞百分比增加（P＜0.05），S 期细胞百分比降低（P＜0.05）。LY294002＋rsTRAIL 蛋白组A549细胞凋亡率为（61.50±3.02）％，显著高于 rsTRAIL蛋白组（3.21％±0.96％）（P＜0.05）。蛋白质印迹检测，与 rsTRAIL蛋白组比较，LY294002＋rsTRAIL蛋白组 A549细胞中 p-Akt、c-FLIPL和Bcl-2蛋白表达水平降低（P＜0.05），Bax/Bcl-2比值升高（P＜0.05）。结论：LY294002能够抑制 PI3K活性，增强 rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用。
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PI3K-Akt 通路对老年心肌缺血预适应模型大鼠线粒体通透性转换孔开放程度的影响
目的：探讨 PI3K-Akt 通路对老年心肌缺血预适应（IPC）模型大鼠线粒体通透性转换孔（mPTP）开放程度的影响，阐明其可能机制。方法：21～23月龄 Wistar 大鼠35只随机分为缺血再灌注（I／R）组、I／R＋PI3K抑制剂 Wortmannin （Wort）组、IPC 组、IPC＋Wort 组和假手术组，每组7只。分别建立 I／R、IPC模型，Wort 组大鼠再灌注前尾静脉注射 Wort 0.6 mg· kg－1。120 min 再灌注结束后，提取心肌组织蛋白， Western blotting 法检测大鼠心肌组织中 Akt 及 p-Akt 蛋白相对表达水平。差速离心法分离大鼠心肌线粒体，酶标仪检测线粒体内超氧化物水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性及心肌 mPTP 开放程度。结果：与 I／R 组（0.288±0.071）比较，IPC 组大鼠心肌组织 p-Akt 蛋白相对表达水平（0.346±0.051）明显升高（P ＜0.05）， I／R＋Wort 组大鼠心肌组织中 p-Akt 蛋白相对表达水平（0.044±0.010）明显降低（P ＜0.01）。与 I／R 组（0.216±0.024）比较， IPC 组大鼠粒线粒体超氧化物水平（0.187±0.022）明显降低（P ＜0.05）， I／R＋Wort 组大鼠粒线粒体超氧化物水平（0.218±0.029）无明显变化（P ＞0.05）。与 I／R 组（1.15±0.15）比较，IPC 组大鼠线粒体 SOD 活性（1.39±0.14）明显升高（P ＜0.05），I／R＋ Wort 组大鼠线粒体 SOD 活性（1.17±0.21）无明显变化（P ＞0.05）。在6～20 min 时，与 I／R 组比较，IPC 组大鼠心肌 mPTP 开放程度明显降低（P ＜0.05）， I／R ＋ Wort 组大鼠心肌 mPTP 开放程度无明显变化（P ＞0.05）；与 IPC 组比较， IPC＋Wort 组大鼠心肌 mPTP 开放程度明显增加（P ＜0.05）。结论：老年大鼠 IPC 可通过激活 PI3K-Akt 通路抑制心肌 mPTP 的开放。
关键词： 缺血再灌注 缺血预适应 磷脂酰肌醇 3 激酶 蛋白激酶 B 线粒体通透性转换孔
