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氧化型低密度脂蛋白及其受体SR-PSOX在类风湿关节炎患者中的表达
目的 分析氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及其清道夫受体SR-PSOX在RA患者中的表达水平,探讨ox-LDL与疾病活动度之间的关系.方法 采用ESLIA法检测RA患者和健康体检者血清以及RA、OA、炎性关节炎(IA)患者关节滑液ox-LDL表达水平,同时采用蛋白质印迹法检测RA及IA患者关节滑液来源的混合细胞中SR-PSOX表达情况.RA患者临床资料分析采用非参数检验,t检验分析RA及对照组血清中的ox-LDL表达水平的差异,Pearson相关分析RA患者ox-LDL与CRP、ESR等炎性指标及疾病活动度之间的相关性.结果 RA患者血清ox-LDL表达水平[(3 076±131) mU/ml]高于健康对照组[(2 334±84) mU/ml] (t=4.242,P＜0.01).RA滑液ox-LDL表达水平[(4 963±254) mU/ml]高于OA组[(3 956±347) mU/ml] (t=2.372,P＜0.05).RA滑液混合细胞SR-PSOX表达水平高于IA组[(4.92±0.18)和(0.24±0.04),t=33.53,P＜0.01].RA血清ox-LDL表达水平与ESR、CRP及整体疾病活动度DAS28评分呈负相关(分别为r=-0.42,P=0.009;r=-0.35,P=0.029 7;r=-0.42,P=0.008 4).中度疾病活动度患者血清ox-LDL表达水平高于高度疾病活动度患者,且差异有统计学意义[(3 302±138) mU/ml和(2 464±228)mU/ml,t=3.335,P＜0.01],而低疾病活动度和病情缓解的RA患者ox-LDL表达水平较高疾病活动度患者虽有上升趋势但差异无统计学意义.经DMARDs治疗后,RA患者ox-LDL整体有轻微上升趋势,但差异无统计学意义.ox-LDL/LDL-C或ox-LDL/HDL-C与DAS28无相关性.结论 RA患者血清及滑液高表达ox-LDL,滑液高表达其受体SR-PSOX,血清ox-LDL水平与ESR、CRP、DAS28呈负相关,与疾病活动度有关,提示ox-LDL及其受体SR-PSOX可能在RA致病中发挥着一定作用,仍需进一步深入探讨.
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清道夫受体SR-PSOX基因定点突变的研究
目的 构建清道夫受体SR-PSOX点突变体,揭示该受体与脂质结合的关键位点,为确定SR-PSOX在脂质摄取、泡沫细胞形成中的作用提供模型.方法 利用分子克隆及PCR定点突变技术,构建不同突变点的片段并克隆到pEGFP-N3中,形成含有SR-PSOX各联合突变的pEGFP-SR-PSOX突变体质粒.转染293T细胞后采用流式检测受体表达情况.结果 从THP-1源性的巨噬细胞中成功克隆SR-PSOX受体并在真核表达载体pEGFP-SR-PSOX基础上获得了SR-PSOX三种突变体(R78、R82H85、R78R82H85).测序结果表明SR-PSOX序列中发生了预期的突变,使SR-PSOX受体中第78位精氨酸单点突变,第82位精氨酸、第85位组氨酸双点突变,第78、82位精氨酸和第85位组氨酸三点突变,均突变为丙氨酸.并将所有pEGFP-SR-PSOX突变体在293T细胞膜表面成功表达.结论 定点突变PCR可以成功构建SR-PSOX受体的3种突变体,使之在293T细胞表面获得表达,为进一步研究SR-PSOX的功能奠定了基础.
