黄芪甲苷对体外高迁移率族蛋白B1介导小鼠调节性T细胞免疫功能的影响
摘要： 目的：观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）刺激的小鼠调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）对CD4＋CD25-T细胞免疫功能的影响及黄芪甲苷（AST Ⅳ）对HMGB1介导Treg免疫功能的拮抗作用。方法采用清洁级BALB/c小鼠，活杀后分离脾脏的CD4＋CD25＋Treg、CD4＋CD25-T细胞，将CD4＋CD25-T细胞在48孔板上随机分为4组（每组12孔）培养，对照组：单纯CD4＋CD25- T细胞；Treg实验组：CD25＋∶CD25-按照1∶10比例加入100μl CD4＋CD25＋Treg与CD4＋CD25-T细胞共同培养；HMGB1＋Treg组：按CD25＋∶CD25-比例为1∶10加入100μl经HMGB1（1μg/ml）刺激72 h的Treg与CD4＋CD25-T细胞进行共培养；HMGB1＋AST IV＋Treg组： CD25＋∶CD25-按照1∶10比例加入100μl经HMGB1（1μg/ml）、AST IV（100μg/ml）刺激72 h的CD4＋CD25＋Treg与CD4＋CD25-T细胞共同培养。以上4组均于培养后72 h重新分离收集CD4＋CD25-T细胞及其上清液，采用噻唑蓝（MTT）法检测脾脏CD4＋CD25-T细胞增殖活性；ELISA法检测CD4＋CD25-T细胞活化核因子（NFAT）活性、孵育上清液IL-2表达。结果将CD4＋CD25＋Treg加入CD4＋CD25-T细胞培养后，CD4＋CD25-T细胞增殖活性受到抑制（0.166±0.039），P＜0.01，NFAT活性（0.156±0.035）、IL-2水平（2.38±0.58）pg/ml均较对照组下降（P＜0.01）。加入经HMGB1刺激的Treg后，CD4＋CD25-T细胞增殖活性受抑制程度逆转（0.477±0.097），P＜0.01。与CD4＋CD25＋Treg组比较，HMGB1＋Treg组NFAT活性（0.409±0.094）、IL-2（4.55±0.96）pg/ml均升高（P＜0.01）。与HMGB1＋Treg组比较，HMGB1＋AST Ⅳ＋Treg组CD4＋CD25-T细胞增殖受抑制程度加重（0.287±0.052）、NFAT活性（0.261±0.046）、IL-2水平（2.73±0.62）pg/ml降低（P＜0.01）。结论 HMGB1在体外可抑制小鼠Treg免疫功能发挥，而ASTⅣ可拮抗HMGB1对Treg免疫功能的抑制作用，表明其对HMGB1介导的促炎效应具有治疗作用。
