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虫草素预处理减轻SD大鼠心肌缺血再灌注损伤
目的:研究大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤中,虫草素(cordycepin,Cordy)能否通过调节微小RNA-455(miR-455)的表达和减少内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)引起的凋亡发挥心肌保护作用.方法:体重250~300 g的SD大鼠随机分为3组:对照(control)组,大鼠只进行开胸手术;IR组,大鼠心肌缺血30 min,再灌注120 min;虫草素治疗组(IR+Cordy组):大鼠缺血再灌注前给予虫草素(10 mg/kg)股静脉注射,每天1次,共注射1周.全自动化学分析法检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)活性.TUNEL试剂盒检测心肌内皮细胞(endothelial cells,EC)凋亡率,电镜观察EC超微结构的改变.RT-qPCR法检测心肌组织miR-455及ERS介导的细胞凋亡信号通路的标志物葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,Grp78)和caspase-12的mRNA表达.结果:与control组比较,IR组EC的凋亡率明显升高(P<0.05);与IR组比较,虫草素组EC的凋亡率明显下降(P<0.05).与control组比较,IR组的EC线粒体肿胀,膜不规整,内皱疏松有空泡,基粒消失,核膜不规整,染色质浓集、边集,核仁消失,甚至出现凋亡小体;IR+Cordy组与IR组比较症状大为改善.与control组比较,IR组心肌组织Grp78和caspase-12的mRNA及miR-455含量均升高(P<0.05);与IR组比较,IR+Cordy组Grp78和caspase-12的mRNA及miR-455的含量均降低(P<0.05).结论:虫草素可有效减轻心肌IR后大鼠心肌EC凋亡,降低心肌组织miR-455表达,抑制内质网应激.
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在线提取HPLC法测定两种虫草中腺苷和虫草素的含量
目的 建立测定两种虫草样品中腺苷和虫草素含量的在线提取高效液相色谱定量分析方法.方法 样品提取条件为:样品粉末和硅藻土均匀混合后置于空预柱芯中,并装入预柱套,组成样品提取池;将样品提取池置于70℃柱温箱中,以水为提取溶剂,提取溶剂以流速1.5 mL·min-1依次通过提取池、保护柱ZORBAX SB-Aq(4.6 mm×12.5 mm,5μm)和分析柱ZORB-AX SB-Aq(4.6 mm×150 mm,5μm)产生压力进行在线加压溶剂提取及色谱分析.色谱条件:ZORBAX SB-Aq (4.6mm×150 mm,5μm)色谱柱,柱温20℃,流动相为水-甲醇梯度洗脱,流速1.5 mL· min-1,检测波长260 nm.结果 腺苷及虫草素质量浓度分别在1.01～50.32 μg·mL-1(r=1.000)和3.98～ 198.94 μg·mL-1(r=1.000)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为103.5％及97.8％,RSD均小于5％;3批冬虫夏草样品的腺苷含量范围为0.24～0.30 mg·g-1;3批蛹虫草样品的腺苷含量范围为0.18～0.37 mg·g-1;虫草素仅在3批蛹虫草样品中被检测到,其含量为0.74～ 1.19 mg·g-1.结论 该方法准确可靠,可用于冬虫夏草和蛹虫草的质量评价.
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虫草素对人舌癌细胞凋亡、自噬的影响及其分子机制
目的 研究虫草素对人舌癌TCA-8113细胞的细胞周期、凋亡和自噬的影响并探讨虫草素抑制舌癌发生的作用机制.方法 用CCK-8法检测虫草素对TCA-8113细胞增殖的作用;用流式细胞术检测不同浓度药物对细胞周期、细胞凋亡的影响;用荧光定量PCR和Western blot的方法检测凋亡相关基因Caspase-3,Caspase-9,Bcl-2、Bax;免疫组化方法检测自噬相关蛋白LC-3β,P62,p-mTOR,AMPK.结果 CCK-8细胞增殖检测结果表明,虫草素能明显抑制TCA-8113细胞的增殖,24 h时IC50为3.548 mg/mL;48 h时IC50为1.185 mg/mL;流式细胞结果显示,诱导细胞周期阻滞与S期,虫草素能显著的诱导TCA-8113细胞凋亡,并且呈浓度依赖性.荧光定量PCR和Westen blot结果表明,虫草素可诱导促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达(P<0.05);免疫组化的结果表明,虫草素可促进LC-3β和AMPK的表达,抑制P62和p-mTOR的表达(P<0.05).结论 虫草素对TCA-8113细胞的抑制并促进细胞凋亡,同时通过AMPK/mTOR通路诱导细胞自噬.
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虫草素对人宫颈癌Hela细胞株增殖及凋亡的影响
目的 观察不同浓度虫草素对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响.方法 不同浓度虫草素处理Hela细胞24 h,倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot检测凋亡相关蛋白.结果 Hela细胞增殖活性随虫草素浓度增加而降低(P＜0.05),虫草素引起Hela细胞早期凋亡(P＜0.05),降低Bcl-2蛋白、增加Bax蛋白表达,诱导Cleaved-PARP裂解.结论 虫草素通过下调Hela细胞中Bcl-2并上调Bax表达,促进早期凋亡.
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虫草素抑制肺癌细胞增殖的体外研究
目的 探究虫草素对肺癌细胞增殖的调节作用及其对细胞相应生理指标的影响.方法 建立肺癌细胞体外培养体系,将生长状态良好的细胞进行分组,并分别与浓度为0、20、40、70、100、1 000 μmol/L的虫草素共培养24h,通过MTT法测定肺癌细胞的增殖率,同时采用一氧化氮(NO)检测试剂盒测定各药物处理组细胞中NO的含量.结果 20μmol/L及其以上浓度的虫草素能显著抑制肺癌细胞的增殖(P＜0.01),显著降低肺癌细胞中NO的相对含量(P＜0.05或0.01),且呈剂量依赖性.结论 虫草素对肺癌细胞的增殖具有显著的抑制效果,且可能通过介导NO相关的信号途径抑制细胞增殖.
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以虫草素为配体的钌多吡啶(Ⅱ)配合物的抗肿瘤活性研究
目的 研究虫草素为配体的钌多吡啶(Ⅱ)配合物的抗肿瘤活性.方法 以虫草素(3'-脱氧腺苷)为配体,合成了3种钌(Ⅱ)配合物[Ru(L)2(DOA)]Cl2(L=bpy,1;phen,2;dmbpy,3;DOA=3'-脱氧腺苷),采用MTT法和流式细胞术分析体外抗肿瘤活性.结果 MTT法结果表明配合物1,2和3对皮肤癌细胞A375生长表现出明显的抑制作用,且其抗肿瘤活性优于配体虫草素;流式细胞分析结果表明,配合物1是通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤细胞生长.结论 以虫草素为配体的钌多吡啶配合物具有一定的抗肿瘤活性.
关键词： 虫草素 钌(Ⅱ)多吡啶配合物 抗肿瘤活性 MTT分析 流式细胞术 -
虫草素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响
目的 观察虫草素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的离体大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和syndecan-4蛋白表达的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分别应用终浓度为20 ng/mL TNF-α、20 μmol/mL虫草素、40 μmol/mL虫草素、20 ng/mL TNF-α+20 μmol/mL虫草素、20 ng/mL TNF-α+40 μmol/mL虫草素作用24 h,并设对照组进行比较.采用MTS/PMS法确定VSMCs的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定VSMCs中syndecan-4蛋白的表达.结果 (1)与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMCs的增殖(P<0.05),而虫草素不同剂量组单独应用对大鼠VSMCs的增殖均无明显作用(P>0.05).TNF-α联合虫草素共同作用组与TNF-α组比较,VSMCs增殖均显著减少(P<0.05).(2)Western blot蛋白免疫印迹法测定显示:与对照组比较,TNF-α组能显著刺激VSMCs的syndecan-4蛋白表达(P<0.05),而虫草素不同剂量组单独应用对VSMCs的syndecan-4蛋白表达均无明显影响(P>0.05).TNF-α联合虫草素共同作用组与TNF-α组比较,VSMCs的syndecan-4蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 虫草素可明显抑制TNF-α诱导的VSMCs增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达.
关键词： Syndecan-4 虫草素 肿瘤坏死因子α 血管平滑肌细胞 细胞增殖 -
虫草素对动脉硬化闭塞患者血管平滑肌细胞增殖及ERK1/2蛋白表达的影响
目的 观察虫草素对动脉硬化闭塞(ASO) 患者下肢动脉原代培养血管平滑肌细胞(VSMCs) 增殖及PCNA、ERK1/2蛋白表达的影响,探索不同浓度虫草素对原代VSMC 增殖影响的剂量-效应关系以及MAPK/ERK1/2信号通路在其中所发挥的作用.方法 收集ASO 患者下肢截肢标本分离动脉平滑肌,用贴壁法原代培养VSMCs.取生长较好的第4 ～ 8代VSMCs,培养到60％ ～ 70％ 时,换用无血清培养液饥饿培养24 h,使细胞同步于静止期.采用不同浓度虫草素(0、15、45、75、125、250 μmol/L) 单独或加入PD98059阻断MAPK/ERK1/2通路后联合使用不同浓度虫草素处理.用CCK-8法检测VSMCs增殖,Western blot测定PCNA、ERK1/2蛋白的表达.结果 虫草素作用后的ASO 患者VSMCs的增殖能力下降,并且随着药物浓度的增加,VSMCs增殖活力越低,差异有统计学意义(P ＜ 0. 05) .虫草素对ASO 组VSMCs增殖活力的影响基本上与未加PD98059阻断MAPK/ERK1/2信号通路时的结果 相同.虫草素作用ASO 组VSMCs 24 h后,细胞PCNA 蛋白的表达下降,且随药物浓度的增加,表达越低(P ＜ 0. 05);药物浓度在250 μmol/L,ERK1/2蛋白表达下降,差异有统计学意义(P ＜ 0. 05) .虫草素对ASO 患者VSMCs的增殖活力、PCNA 表达的影响不能被PD98059所抑制,差异无统计学意义(P ＞ 0. 05);浓度在250 μmol/L 时,虫草素下调ASO 组VSMCs ERK 的表达,这一作用能被PD98059强化,差异有统计学意义(P ＜ 0. 05) .结论 虫草素对ASO 患者VSMCs的异常增殖具有显著抑制作用,其发挥作用可能不止通过MAPK/ERK1/2信号通路进行传导,可能还存在其他相关机制.
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虫草素对人骨肉瘤细胞株MG63增殖及凋亡的影响
目的 研究不同浓度虫草素对人骨肉瘤细胞株MG63增殖与凋亡的影响.方法 不同浓度虫草素作用于MG63细胞48 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTS法检测虫草素对MG63细胞增殖活性的 影响,流式细胞术检测虫草素对MG63细胞周期和凋亡的作用,Hoechst 33342染色和Western blot检测虫草素 对骨肉瘤细胞凋亡的影响.结果 虫草素对人骨肉瘤细胞增殖有显著抑制作用,且呈浓度和时间依赖性. 流式细胞术结果显示该细胞被阻滞在S期和G2/M期(P＜0.05),同时虫草素可引起MG63细胞早期凋亡(P＜0.05)o Western blot结果显示,随虫草素浓度增加,Bel-2蛋白表达下调,而Bax蛋白表达上调,且各实验 组均出现蛋白分子量为89kD的PARP裂解条带.结论 虫草素通过下调MG63细胞中凋亡抑制蛋白Bel-2并上调促凋亡蛋白Bax表达,同时阻滞细胞周期进展,促进早期凋亡.
关键词： 人骨肉瘤细胞MG63 虫草素 凋亡 Bcl-2 -
虫草素诱导巨噬细胞表达血红素氧合酶-1负向调控细胞因子分泌
目的:研究虫草素(cordycepin)负向调控脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞分泌细胞因子的分子机制.方法:体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,用不同浓度的虫草素处理后,加入LPS刺激8h.ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-12的产生及细胞核内p65的含量;Western blot检测血红素氧合酶-1(HO-1)的表达以及IκB和p38的磷酸化;免疫荧光检测核转录因子Nrf2的核转位.结果:1～30 μg/mL虫草素预处理RAW 264.7细胞后,可明显减少LPS处理后TNF-α、IL-6和IL-12的分泌,同时也能降低细胞核内NF-κB亚基p65含量以及IκB的磷酸化.此外,不同浓度的虫草素也能诱导RAW264.7细胞表达HO-1,并能诱导p38磷酸化以及Nrf2核转位.采用p38抑制剂SB203580预处理,或采用Nrf2 siRNA沉默其表达后,HO-1表达水平明显降低.而采用HO-1抑制剂处理后可逆转虫草素对细胞因子的抑制效应.结论:虫草素可能通过下调NF-κB的活性、激活p38和Nrf2诱导HO-1表达,终发挥其抗炎效应.
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虫草素对非小细胞肺癌细胞株H358增殖行为及相关基因表达的影响
目的:研究虫草素对非小细胞肺癌细胞株 H358增殖行为及相关基因表达的影响.方法:选择C57BL/6小鼠作为实验动物,培养非小细胞肺癌细胞株H358后建立移植瘤小鼠模型;将移植瘤小鼠分为给予百令胶囊治疗的干预组以及不进行药物治疗的模型组.治疗后30天时,测定移植瘤组织中增殖活力指标、增殖基因及侵袭基因的表达量.结果:治疗后30天时,干预组小鼠移植瘤病灶内PCNA、Ki-67的mRNA 表达量及蛋白表达量均显著低于模型组,移植瘤病灶内 Notch-1、Bmi-1、MIF、Rap2a、NGAL、SIRT1的mRNA表达量显著低于模型组,PAQR3、LATS1、E-cadherin、ZO-1、TES的mRNA表达量显著高于模型组.结论:虫草素能够抑制移植瘤组织中非小细胞肺癌细胞株 H358的增殖及侵袭性生长.
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虫草素对体外培养肺癌细胞株A549恶性生物学行为的调节及其与相关miRNA表达的关系
目的:研究虫草素对体外培养肺癌细胞株A549恶性生物学行为的调节作用及其与相关miR-NA表达的关系.方法:取c57小鼠并喂饲虫草素或生理盐水,处死后取血清;培养肺癌细胞中A549,分为对照组(无血清培养基处理)、虫草素组(虫草素喂饲小鼠的血清处理)、顺铂组(顺铂联合生理盐水喂饲小鼠的血清处理)以及联合处理组(顺铂联合虫草素喂饲小鼠的血清处理),检测细胞的生长情况、迁移情况以及miRNA的含量.结果:(1)虫草素组、顺铂组的OD值、发生迁移的细胞数目均低于对照组(均P＜0.01);联合处理组的OD值、发生迁移的细胞数目均低于对照组、虫草素组、顺铂组(均P＜0.01);(2)顺铂组和虫草素组的miR-126、miR-145、miR-205、miR-429、miR-499a含量均高于对照组(均P＜0.05),联合处理组的miR-126、miR-145、miR-205、miR-429、miR-499a含量均高于对照组、顺铂组和虫草素组(均P＜0.05);(3)miR-126、miR-145、miR-205、miR-429、miR-499a的模拟物能够降低细胞的OD值、减少发生迁移的细胞数目;(4)miR-126、miR-145的模拟物能够降低Bcl-2的mRNA含量,miR-205、miR 429、miR-499a的模拟物能够降低MMP9的mRNA含量.结论:虫草素能够抑制肺癌细胞株的增殖和迁移过程,miR-126/miR-145-Bcl2途径和miR-205/miR-429/miR-499a-MMP9途径是虫草素发挥调节作用的分子机制之一.
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虫草素调节肺癌细胞株 A549恶性生物学行为的实验研究
目的：：研究虫草素对肺癌细胞株 A549增殖、凋亡、侵袭相关分子表达量的影响.方法：培养肺癌细胞株 A549,用不同剂量虫草素(0、0．25、0．5、1．0、2．0、4．0 ng/mL)处理24 h 后,测定细胞中增殖、凋亡、侵袭相关分子的 mRNA 表达量.结果：0．25、0．5、1．0、2．0、4．0 ng/mL 虫草素处理后,Caspase-3、Caspase-8、NOX1、LATS1的 mRNA 表达量均显著高于0 ng/mL 虫草素,CyclinD1、Bcl-2、c-Myc、c-FLIP、TRAF6、N-cadherin、Vimentin 的 mRNA 表达量均显著低于0 ng/mL 虫草素；虫草素剂量越大, Caspase-3、Caspase-8、NOX1、LATS1的 mRNA 表达量越高,CyclinD1、Bcl-2、c-Myc、c-FLIP、TRAF6、N-cadherin、Vimentin 的 mRNA 表达量越低.结论：虫草素对肺癌细胞株 A549中促凋亡基因的表达具有促进作用,对促增殖和促侵袭基因的表达具有抑制作用.
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虫草酸和虫草素对肝星状细胞炎症及纤维化发生特性的影响
目的 探讨虫草酸和虫草素对肝星状细胞(HSC)的炎症表型和纤维化发生特性的影响.方法 以内毒素(LPS,100 ng/ml)刺激传代培养的小鼠HSC株JS1的炎症反应,药物处理组在LPS刺激同时用不同浓度(10、50或200 μmol/L)的虫草酸和虫草素处理,采用实时定量逆转录PCR法检测炎症趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达；酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中MCP-1蛋白的分泌.用转化生长因子p 1(TGF β 1,10 ng/ml)刺激HSC纤维化反应,药物处理组在TGF β1刺激同时用不同浓度虫草酸和虫草素药物处理,采用Western blot法检测I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达.采用双侧t检验作统计学分析. 结果 200 μ mol/L虫草酸和虫草素处理可显著抑制LPS刺激下JS1细胞MCP-1的mRNA和蛋白表达的增加,[mRNA相对表达量:(2.07±0.29)比(3.35±0.26),t=15.90,(1.15±0.23)比(4.17±0.61),t=8.93；蛋白表达量:(1.88±0.06)比(2.33±0.06),t=10.39,(1.47±0.25)比(1.97±0.04),t=4.6,P值均＜0.05]；此外各不同浓度药物组可抑制TGF β1刺激下JS1细胞的Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达的上调,以200μmol/L药物组抑制作用为明显. 结论 虫草酸和虫草素可减轻LPS刺激下的HSC的炎症表型以及TGF β1刺激下HSC的纤维化反应,这可能是其对肝纤维化治疗作用的主要机制.
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RP-HPLC法测定北虫草发酵培养物中虫草素的含量
目的:建立测定北虫草发酵培养物中虫草素含量的方法.方法:采用反相高效液相色谱法.色谱柱为DIAMONSIL-C18(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲醇(5:90:5),流速为0.8 mL·min-1,柱温为40℃,检测波长为259nm.结果:虫草素检测浓度在2.56～51.20 μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 8)；平均回收率为98.35％,RSD=2.71％(n=6).结论:本方法灵敏、快速、准确,适用于北虫草发酵培养物中虫草素的检测.
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虫草素对乳腺癌细胞株TMSG-1表达的影响及意义
目的 探讨虫草素对不同转移潜能乳腺癌细胞株TMSG-1蛋白表达的影响和TMSG-1蛋白在乳腺浸润性导管癌组织表达的意义.方法 免疫组化技术检测经不同浓度的虫草素溶液(0、1、2、4 μg/ml)处理24 h后,人不同转移潜能乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞爬片中TMSG-1蛋白的表达,同时检测66例乳腺浸润性导管癌组织中TMSG-1蛋白的表达,并选取癌旁组织和乳腺正常组织作为对照.结果 细胞免疫组化显示,高转移潜能MDA-MB-231细胞阴性,低转移潜能MCF-7细胞阳性,虫草素2μg/ml可以上调MCF-7、MDA-MB-231细胞TMSG-1蛋白的表达,而MCF-7蛋白表达明显高于MDA-MB-231蛋白的表达,差异有统计学意义(P＜0.01);66例乳腺浸润性导管癌组织中TMSG-1蛋白表达与肿瘤的淋巴结转移有明显负相关性(P＜0.005).结论 虫草素2μg/ml均可以上调两个细胞株的TMSG-1蛋白表达,发挥潜在的抗肿瘤细胞浸润转移的作用.
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虫草素抑制脂多糖诱导气道上皮细胞损伤作用机制研究
目的:研究虫草素抑制脂多糖(LPS)诱导气道上皮细胞损伤作用机制.方法:培养气道上皮细胞9HTZ,50μg／ml的LPS干预9HTZ细胞8h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,并收集细胞上清波和细胞,采用酶联免疫法(ELISA)法检测细胞上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β),采用Western blot法检测细胞中和转录因子NF-κB、细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达.结果:虫草素(50,100μmol/ml)组能显著抑制LPS诱导的9HTZ细胞的凋亡,并能显著性抑制细胞上清波中的IL-6、IL-1β、TNF-α的含量,抑制细胞中NF-κB、ICAM-1蛋白的表达.讨论:虫草素能保护LPS诱导的气道上皮细胞损伤.
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HPLC测定虫草培养基中腺苷和虫草素的含量
目的 测定虫草培养基中腺苷和虫草素的含量.方法 采用HPLC法,色谱柱为Waters Nova-Pak C18柱(300 mm×3.9 mm,4 μm);流动相为水-甲醇-醋酸(185:14:1);流速1.0 ml·min-1,检测波长260 nm.结果 腺苷的线性范围为2.5～50.0 μg ·ml-1 (r=0.9999),回收率为104.5%,RSD=1.32%;虫草素的线性范围为6.5～130.0 μg ·ml-1 (r=0.9999),回收率为106.1%,RSD=1.46%.结论 该方法 灵敏、快速、准确,适用于虫草培养基中腺苷和虫草素的检测.
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虫草素对补体复合物介导的足细胞损伤的保护作用
目的 探讨冬虫夏草的生物活性单体成分——虫草素(3'-脱氧腺苷)对补体介导的足细胞损伤的保护作用及其可能机制.方法 补体复合物C5-9介导的足细胞损伤作为膜性肾病的体外模型.采用永生化的小鼠足细胞株MPC5建立细胞损伤模型,虫草素作为干预药物.用电镜观察细胞超微形态结构的变化,用免疫荧光染色观察细胞骨架F-actin结构和足细胞特异蛋白nephrin的表达,用Western blot检测信号通路丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.结果 C5b-9刺激细胞3h后,细胞二级足突消失,细胞骨架结构明显损伤,F-actin应力纤维混乱,nephrin分布由胞膜移至胞浆,并引起p38、JNK、ERK磷酸化.虫草素能够保护足细胞的足突和细胞骨架结构,抑制nephrin的重分布,并显著抑制补体介导的p38/JNK信号通路活化.结论 虫草素能保护足细胞对抗补体介导的损伤,其机制至少部分是通过抑制pa8/JNK信号通路活化而实现的.
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虫草素对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用
目的:研究虫草素对大鼠角膜新生血管的作用及其对角膜组织血管内皮生长因子(VEGF)和其受体VEGFR2表达的影响.方法:48只SD大鼠右眼采用1 moL/L氢氧化钠(NaOH)角膜贴纸方法灼伤角膜制备角膜新生血管模型,造模后隔日随机给予生理盐水0.1 mL(模型对照组)、地塞米松0.6 mg/kg(阳性对照组)、虫草素4 mg/kg(高剂量组)、虫草素2 mg/k(低剂量组)球结膜下注射,每组12只,另取4只未造模大鼠对侧健康眼球为正常对照组;于造模成功后第4、8及14天时分次处死大鼠取角膜组织,HE染色观察各组大鼠角膜组织学改变,测量各组角膜新生血管面积,夹心法ELISA检测角膜VEGF的表达,SP法检测VEGFR2的表达.结果:48只模型大鼠右眼角膜烧灼区域呈灰白色混浊,与正常对照组比较,造模后各组角膜均有新生血管生成,提示造模成功;与正常对照组比较,高剂量组和造模第8天后的低剂量组角膜新生血管生长面积较小,高剂量组角膜组织中VEGF、VEGFR2表达减少,差异具有统计学意义(P＜0.05);与高剂量组比较,低剂量组角膜新生血管生长面积更大,且VEGF、VEGFR2表达较多,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:较大剂量虫草素能有效抑制NaOH所致大鼠角膜新生血管的形成,其机制可能与虫草素抑制灼伤角膜组织中VEGF表达有关.
关键词： 虫草素 碱烧伤 角膜新生血管 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体2
